[发明专利]利用三环葵烷－9－基－二硫代碳酸酯钾盐诱导骨髓基质细胞向神经元分化的方法

摘要

本发明公开了一种利用D609诱导骨髓基质细胞向神经元分化的方法，该方法由骨髓基质细胞接种培养；无血清培养液清洗；对照组和诱导实验组骨髓基质细胞在pH为7.2条件下预诱导；在浓度为2mg/L～12mg/L的D609，pH 7.4－7.8，饱和湿度、5％的CO₂，37℃条件下诱导以及维持诱导等步骤组成。本发明方法简便、分化率高，且开创了D609作为诱导剂诱导细胞分化的新用途，为干细胞定向诱导分化和其临床应用提供了新的理论和实验依据。

主权项

1.一种利用D609诱导骨髓基质细胞向神经元分化的方法，由以下步骤组成：1)选取处于对数生长期的骨髓基质细胞，接种于培养板各孔中的盖玻片上，置于饱和湿度、5％的CO2、37℃培养箱内，在含有20％小牛血清的M199培养液中培养，至细胞生长达到盖玻片面积的80％～90％；2)用无血清培养液将上述培养板各孔中的细胞清洗1～2次，然后对培养板各孔中的细胞进行分组，确定对照组和诱导实验组，每组不少于4孔；3)对照组的骨髓基质细胞培养液采用去除血清的M199培养基，诱导实验组的细胞培养液除使用对照组培养液外还添加了浓度为2mg/L～12mg/L的D609；4)分别调整上述对照组和诱导实验组骨髓基质细胞的pH值，使pH为7.2，置于饱和湿度、5％的CO2、37℃培养箱培养20～30分钟；5)将步骤4)中对照组和诱导实验组骨髓基质细胞pH调为7.4-7.8，置于饱和湿度、5％的CO2培养箱37℃培养，诱导2～8小时，检测诱导结果。