[发明专利]一种检测拉米夫定耐药HBV DNA的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种检测HBV DNA的方法及其试剂盒，特别是涉及拉米夫定耐药性的检测。根据耐药相关两种主要的突变基因(YMDD突变为YVDD和YIDD)设计特异性突变检测引物和病毒特异性引物及公用的配套探针，或设计特异性突变检测探针和病毒特异性检测探针，分别在三个PCR管中通过相同的PCR程序对同一样本进行实时荧光检测。根据I反应管、V反应管检测Ct值分别与C反应管检测Ct值的差值(ΔCt－i＝Ct－i－Ct－c，ΔCt－v＝Ct－v－Ct－c)，对临床样本中HBV病毒发生YVDD和YIDD耐药突变情况进行判断。本发明的试剂盒性能稳定、灵敏度高于测序，能更精确判断耐药和敏感病毒的共存比例关系，适用于对耐药病毒和总病毒数量关系进行半定量分析。

主权项

1、一种检测拉米夫定耐药HBV DNA的方法，其特征在于使用以下多聚核苷酸：引物1 5’TGTATTCCCATCCCATCATCCT 3’、引物2 5’ATGTTGTACAGATTTGGTCCC 3’、引物3 5’TTGGCTTCCAGTACCACATCATC 3’、引物4 5’CCCCAGTACCACATCATCA 3’、引物5 5’CCCAGAACCACATCATCA 3’、引物6 5’CCCAGTACCACATCATTCAC 3’、引物7 5’CCCAGAACCACATCATTCAC 3’、探针1 5’TCCTATGGGAGTGGGCCTCAG 3’、探针2 5’CCATTTGTTCGGTGGTTCGTAG 3’、探针3 5’ACCACATCATCAATATAACTGAAAGCC 3’、或探针4 5’ACCACATCATCCACATAACTGAAAGC 3’、或者与上述序列同源性大于75％的序列、或者上述所有序列的碱基互补序列，使用其中的任意一种或一种以上的组合。