[发明专利]一种诊断过敏性疾病变应原的检验方法

摘要

本发明涉及一种新型诊断过敏性疾病变应原的检验方法。通过天然或重组的方法获得尘螨、真菌和花粉等变应原，并包被在磁性纳米粒子。包被蛋白A的磁性纳米粒子与待测病人血清孵育后，血清中的大部分IgG被去除。再将血清加入包被有变应原的磁性纳米粒子，血清中IgE与变应原特异性地结合，加入碱性磷酸酶标记的二抗，经温育后形成固相包被抗体－抗原－酶标记抗体复合物。洗涤、分离后加入底物AMPPD做化学发光剂，AMPPD在碱性磷酸酶的催化作用下去磷酸并生产中介体AMPD，AMPD分解发射光子。通过光量子阅读系统记录发光强度，并从标准曲线上计算出待测抗体的浓度。血清特异性IgE超过100IU/ml的即认为该变应原反应为阳性。

主权项

1、一种新型的诊断过敏性疾病变应原的检验方法。包括以下步骤：制备纳米磁性粒子。通过天然或基因工程方法获得尘螨、真菌和花粉等变应原，进行蛋白含量测定，包被磁性纳米粒子。另外，制备用蛋白质A包被的磁性纳米粒子。包被蛋白质A的磁性纳米粒子与待测病人血清孵育后，血清中的大部分IgG被特异性的去除。再将血清加入包被有变应原的磁性纳米粒子，血清中IgE与变应原特异性地结合，在加入碱性磷酸酶标记的抗体，经温育后形成固相包被抗原-抗体-酶标记二抗复合物。经洗涤、分离后加入底物AMPPD作为化学发光剂，AMPPD在碱性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生产不稳定的中介体AMPD。AMPD很快分解，从高能激发状态，回到低能量的稳定态，同时发射光子，这种发光稳定、持续时间可长达1小时。通过光量子阅读系统记录发光强度，并从标准曲线上计算出待测抗体的浓度。