[发明专利]三种新型尿激酶原突变体

摘要

为了消除凝血酶的作用位点，消弱纤溶酶原激活剂抑制剂－1(plaminogen activator inhibitor－1，PAI－1)与尿激酶原的结合，使尿激酶原突变体对凝血酶和PAI－1的抵抗力提高，从而延长尿激酶原在血浆中的半衰期和降低尿激酶原的临床使用量，对天然尿激酶原基因采用PCR定点诱变法进行了突变，对第156位精氨酸(Arg¹⁵⁶)突变为组氨酸(His¹⁵⁶)；对第178，179，181位的精氨酸(^{178，179，181})突变为Lys¹⁷⁸、Lys¹⁷⁹和His¹⁸¹；同时在第156和第178，179，181位的精氨酸(Arg^{156，178，179，181})突变为His¹⁵⁶、Lys¹⁷⁸、Lys¹⁷⁹和His¹⁸¹，获得三种尿激酶原突变体。经序列分析后，连接到动物细胞表达载体，通过脂质体介导将尿激酶原突变体转入中国仓鼠卵巢细胞进行表达，分析了其特点。并用于细菌、酵母和动物生物反应器的表达。

主权项

1.三种具有血栓溶解活性的尿激酶原(pro-UK)突变体(pro-UKm)，它们在天然pro-UK的氨基酸序列基础上经人工定向突变，除突变处的序列外，其它部分不变。三种突变体具有与天然pro-UK同样或更高的溶栓能力，比天然pro-UK有更好的稳定性和更长的半衰期。