[发明专利]减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法

摘要

本发明提供一种减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法，采用Vero细胞、脊髓灰质炎减毒株病毒，在发酵罐中进行培养，通过细胞培养规模的三级放大，使细胞培养面积相当于21000个1升玻璃瓶静置培养的面积，且细胞产量是常规1升瓶静置培养的21000倍，常规10升转瓶培养的2100倍，既减少了培养空间，又降低了培养液用量，同时也减少了劳动力投入，短时间内即可实现大规模制备细胞及病毒液，满足脊髓灰质炎灭活疫苗对大量病毒抗原的需求。另用本发明生产的病毒液制备成疫苗后，质量稳定可靠，安全性及免疫原性良好，经检定全部符合国家生物制品规程的要求。

主权项

1、一种减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法，其特征在于它经过下列工艺步骤：1)、三级放大细胞培养：a、首先对细胞种子进行离心清洗，按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子＝500-1000∶1的比例，接种到5-10升小容量发酵罐中进行细胞培养，控制培养温度35-37℃.pH7.0-7.4，溶解氧30-50％，并于培养第三天开始灌流，灌流量按细胞生长情况由1升/天最终增加到5升/天，培养5-7天，使细胞增殖至1-3×106个细胞/毫升，进行胰酶消化；b、将a步骤胰酶消化过的细胞悬液，按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子＝500-1000∶1的比例，接种于50-85升中容量发酵罐中培养，控制培养温度35-37℃，pH7.0-7.4，溶解氧30-50％，在再循环培养液体积为50-100升条件下，于第三天开始进行再循环培养，培养5-7天，使细胞密度达1-3×106个细胞/毫升，进行胰酶消化；c、将b步骤胰酶消化过的细胞悬液，按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子＝500-1000∶1的比例，接种于300-550升大容量发酵罐中培养，控制培养温度35-37℃，pH7.0-7.4，溶解氧30-50％，培养5-7天，使细胞密度为1-3×106个细胞/毫升；2)、病毒培养：收获c步骤的细胞培养液，用M199洗细胞一次，加入M199培养液，按病毒∶细胞＝0.01-0.1∶1的比例，接种脊髓灰质炎减毒株病毒，进行病毒培养，控制培养温度32-34℃，pH7.0-7.4，溶解氧20-30％，培养48-96小时，收获病毒液。