[发明专利]D－泛解酸内酯水解酶cDNA及其克隆、表达和应用

摘要

D－泛解酸内酯水解酶cDNA及其克隆、表达和应用，涉及D－泛解酸内酯水解酶cDNA结构基因技术领域。本发明利用反转录PCR技术，以串珠镰孢霉(Fusariummoniliforme)CGMCC 0536菌株总RNA为模板合成cDNA第一链，再在引物1、引物2作用下扩增得到长度为1.5kb的片段，经切胶回收并纯化处理后同T载体连接得到克隆载体重组质粒pMD18－T－LAC，在引物3、引物4作用下以该克隆载体为模板扩增，获得长为1146bp的编码D－泛解酸内酯水解酶cDNA的结构基因。构建表达载体重组质粒pTrc99a－LAC或pYX212－LAC及对应的含有以上重组质粒的重组菌。应用重组菌生物转化D－泛解酸内酯或D，L－泛解酸内酯制备D－泛解酸。

主权项

1.一种来源于串珠镰孢霉(Fusarium moniliforme)CGMCC 0536菌株中的D-泛解酸内酯水解酶cDNA，其结构基因核苷酸序列为：ATGGCTAAGC TTCCTTCTAC GGCCCAGATT ATTGACCAGA AGTCCTTTAA TGTCTTGAAG 60GATGTGCCGC CTCCCGCAGT GGCCAATGAC TCTCTGGTGT TCACTTGGCC TGGTGTGACT 120GAGGAGTCTC TTGTTGAGAA GCCTTTTCAT GTCTACGATG AAGAGTTTTA CGACGTCATC 180GGAAAGGACC CCTCTTTGAC CCTCATCGCA ACATCGGACA CCGACCCAAT CTTCCATGAG 240GCTGTCGTAT GGTATCCTCC TACTGAAGAG GTCTTCTTTG TCCAGAATGC TGGCGCTCCC 300GCTGCTGGCA CTGGCTTGAA CAAGTCTTCC ATCATTCAGA AGATTTCCCT CAAGGAGGCC 360GACGAGGTCC GCAAGGGCAA GAAGGATGAG GTCAAGGTCG CGGTTGTTGA CTCAAACCCT 420CAGGTCATCA ACCCCAATGG TGGCACTTAC TACAAGGGCA ACATCATCTT TGCTGGTGAG 480GGCCAAGGCG ACGATGTTCC CTCCGCCCTG TACCTGATGA ACCCTCTCCC TCCTTACAAC 540ACCACCACCC TCCTCAACAA CTACTTTGGT CGCCAGTTCA ACTCCCTCAA CGACGTCGGT 600ATCAACCCCA GGAACGGTGA CTTGTACTTC ACCGATACCC TCTATGGATA CCTCCAGGAC 660TTCCGTCCTG TTCCTGGTCT GCGAAACCAA GTCTATCGTT ACAACTTTGA CACCGGCGCC 720GTCACTGTCG TCGCTGATGA CTTTACCCTC CCTAACGGTA TTGGCTTTGG CCCCGACGGC 780AAGAAGGTCT ATGTCACCGA CACTGGTATC GCTCTTGGCT TTTACGGCCG CAACCTCTCT 840TCACCCGCCT CTGTTTACTC CTTCGATGTA AACCAGGACG GTACTCTCCA GAACCGCAAG 900ACCTTTGCTT ACGTCGCGTC TTTCATCCCC GATGGTGTTC ATACCGACTC CAAGGGCCGT 960GTTTATGCCG GTTGCGGCGA TGGTGTCCAC GTCTGGAACC CTTCGGGCAA GCTAATCGGC 1020AAGATCTACA CCGGTACTGT TGCTGCTAAC TTCCAGTTTG CCGGCAAGGG AAGGATGATT 1080ATTACTGGAC AGACCAAGTT GTTCTATGTT ACTTTAGGGG CTTCGGGTCC CAAGCTCTAT 1140GATTAG 1146。