[发明专利]一种从透明质酸发酵液中制备透明质酸钠的方法

摘要

一种从透明质酸发酵液中制备透明质酸钠的方法，涉及从透明质酸发酵液中制备高分子量、低蛋白质含量的透明质酸钠。本发明采用加热去除菌体、添加蛋白酶去除蛋白质、使用超滤技术去除金属离子小分子和有色物质的从发酵液中制备透明质酸钠。具体工艺为透明质酸发酵液经除菌体、酶解、乙醇沉淀、络合、解离、乙醇沉淀、超滤、乙醇沉淀、洗涤脱水干燥、成品包装而制得分子量为1.8×10⁶、蛋白质含量为0.30％、提取收率98％的透明质酸钠。本发明方法具有操作简便、高效、费用低廉、成品纯度高、环境污染小、易于工业化等优点，不仅可以在实验室中方便实施，而且极易在工业生产中运用。

主权项

1一种从透明质酸发酵液中制备透明质酸钠的方法，其特征是采用发酵液加热、过滤去除菌体，添加蛋白酶去除蛋白质，使用超滤技术去除金属离子和小分子的有色物质的方法，具体工艺为加热除菌体、酶解、乙醇沉淀、络合、解离、乙醇沉淀、超滤、乙醇沉淀、洗涤脱水干燥、成品包装而制得成品透明质酸钠，加热除菌体：将发酵液用蒸馏水稀释一倍后将发酵液温度升到75℃～80℃经过滤去除菌体；酶解：将上清液的pH调至8.0，然后按照滤液的体积，以质量体积比0.05％称取碱性蛋白酶，在37℃下酶解3小时；乙醇沉淀：将经酶解后的发酵清液pH调至7.0～7.2，加入与酶解液体积相等的95％乙醇，充分搅拌，静置沉淀HA；沉淀的溶解：将已经沉淀的HA用与初始发酵液等体积的蒸馏水搅拌溶解；络合沉淀：在上述充分溶解的HA水溶液中边搅拌边缓缓地加入发酵液体积0.1倍的5％的氯化十六烷基吡啶水溶液，从而使水溶液中的HA发生络合沉淀，静置使络合沉淀下沉，弃去上清液；解离：将络合沉淀置于与初始发酵液等体积的0.7～0.8mol/L的NaCl水溶液中充分搅拌解离过夜；乙醇沉淀：将充分解离的溶液过滤，解离液再以2倍初始发酵液体积的95％乙醇沉淀，取出沉淀物HA洗涤；超滤：将沉淀物HA用与初始发酵液等体积的蒸馏水溶解，按照下列条件：0.2MPa、截留分子量为5000的聚醚砜超滤膜进行超滤，去除金属离子和小分子的有色物质；乙醇沉淀：将超滤后的滤液加入1％的乙酸钠，再以2倍初始发酵液体积的95％乙醇沉淀，取出沉淀物HA-Na；洗涤脱水干燥：将HA-Na沉淀物用无水乙醇洗涤二次，再用丙酮洗涤一次后真空干燥，即得HA-Na成品；成品包装：将得到的感官品质良好的HA-Na成品进行包装。