[发明专利]一种可消除非特异性条带的PCR方法以及利用该方法制备的RT－PCR芯片无效
| 申请号： | 200410045031.5 | 申请日： | 2004-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN1718737A | 公开（公告）日： | 2006-01-11 |
| 发明（设计）人： | 杨惠龄;廖端芳;徐阳炎;罗迪贤;李凯 | 申请（专利权）人： | 南华大学 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 衡阳市科航专利事务所 | 代理人： | 傅戈雁 |
| 地址： | 421001湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种可消除非特异性条带、一步法精确获得目的基因的PCR方法以及利用这种方法制备的RT－PCR芯片。具体是指：在PCR(RT－PCR、PCR)目的基因的引物设计时，引物3’末端一个或多个碱基采用硫代磷酸化修饰；延伸反应所用的聚合酶为具有Pfu高保真DNA聚合酶。由于具有最强的3’－5’外切酶活性的Pfu高保真DNA聚合酶可以识别并关闭引物3’末端8bp内任一个或多个碱基不匹配的延伸反应。因此在各种PCR反应中，只允许与引物3’末端8bp内完全匹配的模板得以延伸，并在延伸中保持与模板的高度忠实性。本发明构建了一个多用途、高精度、高通量、适用于芯片技术获得特异基因表达(包括编码区、转录组、表达谱比较)和诊断的技术平台。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 消除 非特 异性 条带 pcr 方法 以及 利用 制备 rt 芯片 | ||
【主权项】：
1、一种可消除非特异性条带的PCR方法，具有常规PCR基本步骤，其特征是在目的基因的引物设计时，引物3’末端一个或多个碱基采用硫代磷酸化修饰；延伸反应所用的聚合酶为具有最强的3’-5’外切酶活性的Pfu高保真DNA聚合酶。
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