[发明专利]一种高通量克隆构建重组杆状病毒的方法

摘要

本发明提出了一种高通量克隆构建重组杆状病毒的方法。它是利用特定限制性内切酶双酶切杆状病毒载体与T₄DNA聚合酶消化特殊设计的引物扩增的PCR片段连接，然后转染昆虫细胞系，从而得到成熟的杆状病毒。本发明可与目前的所有基于PCR建库的方法相容，能够做到零背景、高通量定向克隆，且构建重组杆状病毒的实验周期短、成本低、特别适合大规模的表达真核生物来源的cDNA，以及构建真核生物的cDNA文库，是一个非常有效地构建重组杆状病毒的方法。

主权项

1、一种高通量克隆构建重组杆状病毒的方法，主要包括一个已有的杆状病毒表达载体和经PCR引物扩增目的基因，其特征在于通过对已有的杆状病毒载体系统进行电转化大肠杆菌筛选得到可自主复制的杆状病毒载体，在该载体上引入了两个唯一的特殊限制性内切酶酶切位点序列和荧光蛋白基因表达单元，在扩增目的基因的一对PCR引物的5′端分别引进3-4个特定的碱基，在dGTP，或者dATP，或者dCTP，或者dTTP存在条件下，扩增产物经T4DNA聚合酶消化后产生的粘性末端与载体的双酶切得到的粘性末端匹配，从而可以与在经Bsu 36 I双酶切的载体连接，连接物可直接转染昆虫细胞系，得到重组杆状病毒。