[发明专利]表达人类CYP2J2反义基因的重组腺相关病毒及其制备方法

摘要

一种表达人类CYP2J2反义基因的重组腺相关病毒及其制备方法，本发明所提供的该重组腺相关病毒，是从人类CYP2J2 cDNA长1509bp，编码含503个氨基酸的蛋白质，利用PCR法从人类白细胞DNA中克隆人类CYP2J2 cDNA，通过三种质粒磷酸钙共转染法包装制备含反义目的基因的重组腺相关病毒并纯化，制备的重组腺相关病毒转染不同种类的人肿瘤细胞系，它能明显抑制各种肿瘤细胞的增殖和迁移、促进肿瘤细胞的凋亡，抑制在体肿瘤瘤体的生长和转移。因此，确定，CYP2J2的选择性抑制剂和表达反义CYP2J2基因的重组腺相关病毒是肿瘤治疗的潜在药物。

主权项

1、一种表达人类CYP2J2反义基因的重组腺相关病毒，其中该重组腺相关病毒包括的三种质粒：1)pXX2：为包装质粒，含有编码腺相关病毒Rep蛋白和Cap蛋白的编码序列。并在上游和下游各插入一个p5启动子，使表达效率可以提高15倍，提供rAAV复制所必须的Rep蛋白；2)pXXUF1：真核表达载体，含CMV启动子，有较强的表达效率，其含有一多克隆Not I位点，可以连接不同的目的基因，pXXUF1反向连接人CYP表氧化酶基因，该载体含有rAAV转基因表达所必须的末端重复序列(ITRs)，负责病毒的复制和病毒外壳的包被并携带目的基因；3)pXX6：为辅助质粒，删除了腺病毒的致病基因序列，保留了腺病毒E1A、E2A和VA1 RNA基因，所表达的蛋白质可发挥辅助作用以刺激rAAV基因的转录和翻译，保证rAAV产量；4)以上三种质粒经磷酸钙沉淀法共转染293细胞，即可在293细胞内形成高滴度的含目的基因的rAAV颗粒。