[发明专利]一种重组微生物谷氨酰胺转氨酶基因及其制备方法

摘要

本发明属于食品工业生物技术领域，主要是利用分子生物学和基因工程技术，将来自茂原链霉菌的谷氨酰胺转氨酶基因克隆分离后，构建了含有该基因的重组原核表达载体pQE30xa－TGase，并在大肠杆菌JM109菌株中获得了表达，表达产物经过亲和层析分离纯化后，可以得到纯度为90％左右的重组谷氨酰胺转氨酶，重组后的谷氨酰胺转氨酶酶活性达到2.2U/ml，高于原始菌株2－3倍。利用该酶进行酪蛋白改性和重叠虾的制作均取得良好效果。由于本发明利用大肠杆菌生产谷氨酰胺转氨酶，操作简单，产酶活性较高，生产成本低，表达的酶易于分离纯化，可为今后谷氨酰胺转氨酶的生产提供一条切实可行的途径。

主权项

1.一种重组微生物谷氨酰胺转氨酶基因，长度1246，其特征是：1-180位的核苷酸为编码谷氨酰胺转氨酶基因前导肽的序列，该段序列与酶的跨膜运输和正确折叠有密切关系；420-422位的核苷酸为编码酶活性中心cys的序列；谷氨酰胺转氨酶全长基因序列为：atgcgcatac gccggagagc tctcgtcttc gccactatga 40gtgcggtgtt atgcaccgcc ggattcatgc cgtcggccag 80gcgaggccgc cgccgacaat ggcgcggggg aaagagacga 120agtcctacgc cgaaacctac cgcctcacgg cggatgacgt 160cgcgaacatc aacgcgctca acgaaagcgc tccggccgct 200tcgagcgccg gcccgtcgtt ccgggccccc gactccgacg 240acagggtcac ccctcccgcc gagccgctcg acaggatgcc 280cgacccgtac cgtccctcgt acggcagggc cgagacggtc 320gtcaacaact acatacgcaa gtggcagcag gtctacagcc 360accgcgacgg caggaagcag cagatgaccg aggagcagcg 400ggagtggctg tcctacggct gcgtcggtgt cacctgggtc 440aattcgggtc agtacccgac gaacagactg gccttcgcgt 480ccttcgacga ggacaggttc aagaacgagc tgaagaacgg 520caggccccgg tccggcgaga cgcgggcgga gttcgagggc 560cgcgtcgcga aggagagctt cgacgaggag aagggcttcc 600agcgggcgcg tgaggtggcg tccgtcatga acagggccct 640ggagaacgcc cacgacgaga gcgcttacct cgacaacctc 680aagaaggaac tggcgaacgg caacgacgcc ctgcgcaacg 720aggacgcccg ttccccgttc tactcggcgc tgcggaacac 760gccgtccttc aaggagcgga acggaggcaa tcacgacccg 800tccaggatga aggccgtcat ctactcgaag cacttctgga 840gcggccagga ccggtcgagt tcggccgaca agaggaagta 880cggcgacccg gacgccttcc gctccgcccc gggcaccggt 920ctggtcgaca tgtcgaggga caggaacatt ccgcgcagcc 960ccaccagccc cggtgaggga ttcgtcaatt tcgactacgg 1000ctggttcggc gcccagacgg aagcggacgc cgacaagacc 1040gtctggaccc acggaaatca ctatcacgcg cccaatggca 1080gcctggggtg ccatgcatgt ctcacgagag caagttccgc 1120aactgggtcc gagggttact cggacttcga ccgcggggag 1160ccctatgtgg tatcaccctc tccatcccca agaatgctgg 1200aacaccgccc ccgacaaggt aaagcagggc tggcgtgatg 1240tgagcg 1246