[发明专利]基于原子力显微镜观察的生物样品包埋块的制备方法

摘要

一种基于原子力显微镜观察的生物样品包埋块的制备方法，属于生物工程技术领域。利用2％戊二醛固定液对生物组织样品或细胞样品等进行低温固定，经0.2mol/L磷酸缓冲液冲洗后，按照50％→70％→95％→无水乙醇→绝对乙醇的乙醇梯度进行脱水，经环氧树脂618渗透后进行包埋，然后加热聚合，加热温度和时间为：35℃12小时→45℃12小时→60℃24小时。从而获得了适合于原子力显微镜观察的生物样品包埋块。本发明方法步骤较为简单，所用试剂多为国产，易得且价格低廉，适合各种动物组织和细胞样品的包埋块制作。

主权项

1、一种基于原子力显微镜观察的生物样品包埋块的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1)将生物样品用冰水预冷却的质量百分比为2％的戊二醛固定液低温固定1～2小时；2)将样品用冰水预冷的0.2mol/L磷酸缓冲液冲洗两次后，依次转入质量百分比为50％的乙醇、70％乙醇、95％乙醇、无水乙醇及绝对乙醇，进行乙醇梯度脱水，每次10～15分钟，其中，无水乙醇和绝对乙醇分别各换一次，50％和70％乙醇水溶液需要事先用冰水预冷；3)样品脱水后直接转入环氧树脂618混合液∶绝对乙醇＝1∶1的体积比的液体中并置摇床上渗透1～2小时，然后将此液倒去，加入环氧树脂618混合液，置35℃的温箱中渗透3～5小时；其中环氧树脂618混合液配方为：环氧树脂618∶十二烷基琥珀酸酐∶甲基内次甲基四氢邻苯二甲酸酐∶2，4，6-二甲氨基甲基苯酚＝4∶1∶3∶0.2，该比例为体积比；4)将样品挑出，用环氧树脂618混合液进行包埋，然后加热聚合，聚合温度和时间为35℃12小时，45℃12小时，60℃24小时，得到所需的生物样品包埋块。