[发明专利]胃癌特异性纳米疫苗的制备方法

摘要

本发明公开了胃癌特异性纳米疫苗的制备方法。本发明利用生物性纳米乳剂作为体内药物运输载体，以胃癌特异性多肽抗原MG7为免疫抗原，以含有CpG基序的寡核甘酸(CpG ODN)为免疫佐剂，采用磁力超声法构建共包封有MG7－Ag模拟表位多肽与CpG ODN的纳米疫苗。经高效液相色谱分析，电镜观察以及离心等方法鉴定表明所构建的纳米疫苗粒径控制在20－30nm并具有较高的包封率和稳定性。疫苗免疫接种后，可诱导小鼠产生抗MG7－Ag特异性抗体以及一定数量的特异性CTL分泌IFNγ，抗原－佐剂共包封组优于单表位抗原单独包封组和其他对照组。肿瘤攻击后，共包封疫苗免疫组小鼠成瘤体积明显小于对照组。这一基因疫苗在胃癌的免疫治疗研究，胃癌特异性疫苗的研制方面将具有巨大的潜在价值。

主权项

1.一种胃癌特异性纳米疫苗的制备方法，其特征在于，将人工合成的胃癌特异性抗原MG7模拟表位多肽和免疫佐剂CpG ODN 1645采用纳米乳剂包封，获得胃癌特异性纳米疫苗；具体包括以下步骤：1)在双蒸水中分别加入质量分数0.4％的司盘-80、土温-80；混合均匀得到水相A；2)在另一加入双蒸水的大试管中，先加入质量分数为20％的大豆油，然后各加入质量分数0.2％的胃癌特异性抗原MG7模拟表位多肽和免疫佐剂CpGODN，最后加入质量分数0.4％的司盘-80，混合均匀，得到油相B；3)在3000转/分搅拌下，将油相B逐滴加入到水相A中，滴加完毕后将混合物移至真空高速剪切乳化机上，在0.7Kpa真空下，以23000转/分剪切40分钟，2次；4)剪切后室温冷却20分钟，得到乳白色带乳光液体，冰浴下超声3分钟后再用膜过滤、除菌后4℃保存，即得到20nm-30nm的胃癌特异性纳米疫苗。