[发明专利]MG7－Ag模拟表位构建胃癌特异性多表位基因疫苗的方法

摘要

本发明公开了以胃癌MG7－Ag模拟表位为基础构建的多表位DNA疫苗及其方法。本发明利用HSP70为载体，GGGS为间隔序列，构建含有4个串联不同的MG7－Ag模拟表位与HSP70的融合基因疫苗。经Western blotting鉴定表明融合基因在小鼠骨髓瘤SP2/0细胞中成功表达，并保持了亲本蛋白各自的活性。质粒免疫接种后，融合基因疫苗可诱导小鼠产生抗MG7－Ag特异性抗体以及一定数量的特异性CTL分泌IFNγ，多表位疫苗免疫组优于单表位疫苗组和其他对照组。肿瘤攻击后，疫苗免疫组小鼠成瘤体积明显小于对照组。这一基因疫苗在胃癌的免疫治疗研究，胃癌特异性疫苗的研制方面将具有巨大的潜在价值。

主权项

1.一种MG7-Ag模拟表位构建胃癌特异性多表位基因疫苗的方法，其特征在于，采用单一表位以同源串联形式，以HSP70为载体，GGGS为间隔序列，连续四次PCR，并以前一次PCR的产物作为下一次PCR的模版，将四个不同的模拟表位以及间隔序列连接起来；构建含有4个串联不同的MG7-Ag模拟表位与HSP70的融合基因疫苗，其串联表位的具体核苷酸以及氨基酸序列如下：K P H V H T K G G G SAAA CCA CAT CTA CAT ACA AAA GGA GGA GGA AGTK P H L H F H G G G SAAA CCA CAT CTT CAT TTT CAT GGA GGA GGA AGTK P H S H L H G G G SAAA CCA CAT AGT CAT CTT CAT GGA GGA GGA AGTS W A P V Y A R A NAGT TGG GCT CCA GTT TAT GCT AGA GCT AAT。