[发明专利]番茄靶标基因转化载体的制备方法

摘要

本发明是一种番茄靶标基因和转化载体及其构建方法，该靶标基因片段总长14589pb，其中靶标位点片段长2740pb，靶标基因载体的T－DNA区长8266pb；该T－DNA区序列为图SEQNO.1所示。该转化载体构建第一步是构建靶标位点片段；第二步是构建靶标基因转化载体；第三步是构建该转化载体的中间表达载体菌株；第四步是完成该转化载体的实质构建。当将该转化载体转化至根癌农杆菌菌株EHA105时，即完成该转化载体的受体菌转化，该载体转化表达菌株是根癌农杆菌菌株EHA1301D/1002D，保藏号CCTCCNO：M204094，保藏日为2004/12/09。该靶标基因转化载体最重要的效果：一是转化效率大提高；二是转化位点精确整合。可实现转基因作物规模工厂化生产的效果。本基因转化技术可推介到其它转基因植物的应用中。

主权项

1、一种番茄靶标基因，其含有LOX位点，Cre基因，MAS结构序列和抗性选择标记基因，其特征在于：该番茄靶标基因载体的DNA连接片段总长度为14589bp，其中靶标位点片段长度为2740bp，靶标基因载体的T-DNA区长度为8266bp；该基因载体的T-DNA区核苷酸序列为附图SEQ NO.1所示；该基因的图谱结构特征是，从T-DNA区的左边界到右边界依次是：CaMV PolyA，潮霉素磷酸转移酶标记基因，CaMV35S启动子A，多克隆位点的MCS区，CaMV35S启动子B，单一的LOX，Cre基因，MAS结构序列，LacZ基因，CaMV35S启动子C，Gus基因。