[发明专利]单个核细胞人白细胞抗原A或B检测移植病人免疫状态的方法无效
| 申请号： | 200410075851.9 | 申请日： | 2004-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN1710423A | 公开（公告）日： | 2005-12-21 |
| 发明（设计）人： | 邹雄;张义;杨晓静;秦绪珍;庄学伟;单宁宁;王洪春 | 申请（专利权）人： | 山东大学齐鲁医院 |
| 主分类号： | G01N33/53 | 分类号： | G01N33/53;G01N33/533;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 山东济南齐鲁科技专利事务所有限公司 | 代理人： | 宋永丽 |
| 地址： | 250012山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种单个核细胞人白细胞抗原A或B检测移植病人免疫状态的方法，取脏器移植病人外周血，分离淋巴细胞，提取淋巴细胞总模板核糖核酸，对外周血淋巴细胞总模板核糖核酸进行鉴定，对人白细胞抗原A或人白细胞抗原B特异性引物进行筛选，然后进行一步法一管扩增体系，以上、下游引物作为内参照，然后对扩增产物进行电泳扫描及序列分析，最后采用与上述引物相对应的荧光探针检测人白细胞抗原A或人白细胞抗原B抗原表达强度的高低。它可以通过检测脏器移植病人的外周血单个核细胞人白细胞抗原A或B的抗原表达强度，以达到根据该强度的高低，确定病人用药量，以此提高脏器移植的成功率及病人的身体健康状况等。 | ||
| 搜索关键词： | 单个 细胞 白细胞 抗原 检测 移植 病人 免疫 状态 方法 | ||
【主权项】：
1、单个核细胞人白细胞抗原A或B检测移植病人免疫状态的方法，取脏器移植病人外周血，分离淋巴细胞，提取淋巴细胞总模板核糖核酸，对外周血淋巴细胞总模板核糖核酸进行鉴定，其特征在于：对人白细胞抗原A或人白细胞抗原B特异性引物进行筛选得出：人白细胞抗原A的上游引物5’-CTACCCTGCGGAGATCAC-3’，下游引物5’-AGAGAACCAGGCCAGCAAT-3’，或人白细胞抗原B的上游引物5’-CACACTGACCTGGCAGCGGGAT-3’；下游引物5’-AGAGCCCTGGGCACTGTCGCT-3’，然后进行一步法一管扩增体系，以β-肌动蛋白作为内参照，其上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’，反应体系20-30ul，其中逆转录酶0.2-1.5ul，耐热扩增酶0.1-0.4ul，脱氧核苷酸0.1-0.5ul，氯化镁1-4ul，缓冲液1-6ul，余量是去核糖核酸酶的双蒸水，目的片段人白细胞抗原A的上下游引物或人白细胞抗原B的上下游引物各0.4-2ul，内参照上游引物5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’、下游引物5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’各01.-1ul，模板核糖核酸4-20ul，多聚酶链反应仪反应参数为40-42℃20-40min，90-96℃2-5min，90-96℃0.5-3min，52-60℃0.5-3min，70-75℃0.5-3min，3-10个循环；90-96℃5-30sec，60-65℃10-60sec，30-45个循环，70-75℃3-15min，然后对扩增产物进行电泳扫描及序列分析，最后采用与上述引物相对应的荧光探针检测人白细胞抗原A或人白细胞抗原B信使核糖核酸表达强度的高低。
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