[发明专利]东方百合脱毒小籽球的瓶内生成方法

摘要

本发明提供一种东方百合脱毒小籽球的瓶内生成方法，它经过外植树体选择、灭菌，诱导培养获得脱毒茎尖，再经增殖培养，继代培养，瓶内直接生成脱毒小籽球。本发明针对东方百合成球周期长，病毒容易累积等难点，使东方百合在瓶内直接生成脱毒小籽球，出瓶后可直接下地种植，且移栽成活率高。通过对整个百合种球的生产程序进行调整与优化，简化了脱毒种球的培育程序，大大缩短了东方百合脱毒的培育时间，在降低了生产成本的同时提高了种球质量，加强了国产自育种球的市场竞争力，适于东方百合脱毒种球的规模化生产。

主权项

1、一种东方百合脱毒小籽球的瓶内生成方法，其特征在于经过下列步骤：1)、外植体的选择与灭菌：选择无病虫害、生长健壮、未检测到CMV(黄瓜花叶病毒)和LSV(百合隐症病毒)的百合种球，在3～6℃的低温、黑暗条件下贮藏6～8周后取出，边剥鳞片边用自来水冲洗，去除外部2～3层包裹不紧实的鳞片后，用浓度为0.1％的洗衣粉水浸泡2～5分钟后，用自来水清洗干净，在0.1～0.2％的升汞(Hgcl2)溶液中灭菌15～25分钟，然后在1～3％的次氯酸钠溶液中消毒10～15分钟，用无菌水洗3～5次；2)、诱导培养：在无菌条件下，将灭菌后的鳞片切块接种到下列诱导培养基中培养，在温度为25±2℃，光照时间10～12h/d，光照强度2000～3000Lx的环境条件下，培养20～25d后，在切口处生成不定芽：MS基本培养液6-苄基氨基嘌呤(6-BA) 1.0～2.0mg/L萘乙酸(NAA) 0.1～0.5mg/L蔗糖 30000～40000mg/L琼脂 5000～5500mg/LpH 5.5～6.03)、获得脱毒茎尖：将上述诱导产生的不定芽在36～40℃条件下气热培养10～30天后，在解剖镜下剥取获得0.2～0.5mm的茎尖；4)、增殖培养：在无菌条件下，将步骤3)获得的脱毒茎尖转入下列增殖培养基中：MS基本培养液6-苄基氨基嘌呤(6-BA) 1.0～2.0mg/L萘乙酸(NAA) 0.2～0.5mg/L蔗糖 30000～40000mg/L琼脂 5000～6000mg/LpH 5.5～6.0在温度为26±2℃，光照时间10～12小时/天，光照强度1500～2000Lx的条件下，培养20～25d，使1个茎尖生长成多个不定芽；5)、继代培养：将上述增殖的不定芽在无菌条件下分切为单芽或2～3个一丛，接入同样的增殖培养基中，在相同的培养环境下进行培养，可得到大量的无根不定芽，增殖苗的叶色浓绿，生长健壮，基部膨大成鳞茎形；6)、瓶内直接生成脱毒小籽球：将继代形成的不定芽切去叶片，基部及鳞片切块，接入下列生球培养基中：MS基本培养液萘乙酸(NAA) 0.05～0.1mg/L蔗糖 80000～120000mg/L琼脂 4500～6000mg/L活性炭 500～600mg/LpH 5.5～6.0在温度为20±2℃，黑暗条件下，培养60～70d，不定芽切块及周围直接生成直径0.8～1.2cm，围径3.0～3.5cm的小籽球，每个切块可生成小籽球2～4个。