[发明专利]朝鲜蓟抗菌剂—朝鲜蓟提取物的一种新用途及其生产方法

摘要

本发明介绍了一种朝鲜蓟提取物作为天然抗菌剂的新用途及其生产方法。它将朝鲜蓟叶、花苞、茎干粉通过索氏提取得到的原提取液，分别进行氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到的正丁醇相进行反复SephadexLH－20柱层析和硅胶柱层析分离，得到四个不同组分，再分别进行高压液相制备柱分离，得到8种不同的天然抗菌化合物。本发明的朝鲜蓟各提取物及其各萃取分离成分对大部分测试菌株基本都有抑制作用，而其中以叶子提取物的抑制性最强和正丁醇萃取液的抑菌活性最强。提取物8种活性成分对被测菌株具有广泛的抗菌活性，其最低抑菌浓度在50～200μg/mL之间。

主权项

1、一种朝鲜蓟天然抗菌剂的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1.索氏提取称取500g叶和花苞干粉原料分别置于3000mL 75％乙醇溶液的索氏提取器中，于沸水浴中提取，至索氏提取器内的溶液近乎无色为止；步骤2.提取液蒸发浓缩提取后的约2500mL提取液，旋转蒸发真空浓缩(40℃，0.08MPa)至约800mL浓缩液；步骤3.第一次萃取分离往浓缩后的约800mL溶液中加入400mL的氯仿液进行萃取，分层后，弃去下层的氯仿相，保留水相；步骤4.第二次萃取分离往上次萃取后的水相中加入400mL的乙酸乙酯液进行萃取，分层后，弃去上层的乙酸乙酯相，保留水相；步骤5.第三次萃取分离往第二次萃取后的水相中加入400mL的正丁醇液进行萃取，分层后，弃去下层的水相，保留正丁醇相；步骤6.浓缩各萃取液旋转蒸发真空浓缩(40℃，0.08MPa)三种萃取液，得40mL各浓缩液，用移液管吸取20mL浓缩液于恒重培养皿，在干燥箱内100℃烘6小时，称量，算出其净重，得各种提取物干粉，再取部分干粉溶解在各溶剂中，配置成12.5，25，50mg/mL浓度的各溶液；步骤7.Sephadex LH-20柱分离将萃取后的正丁醇浓缩液20mL置于Sephadex LH-20的凝胶柱上，用70％的甲醇洗脱，自动部份收集器收集，得60个分离试管，分别进行硅胶板分离鉴定和抗菌活性测定，分为4个不同的组分；步骤8.硅胶柱进一步分离第一组分用硅胶柱分离，乙酸乙酯/甲醇/水(7∶1∶1)洗脱；第二组分用硅胶柱分离(乙酸乙酯/甲醇/水(8∶1∶0.2)洗脱)，再用Sephadex LH-20柱分离(甲醇洗脱)，进一步纯化需用制备柱分离；第三组分用硅胶柱分离，乙酸乙酯/甲醇/水(8∶1∶1)洗脱，进一步纯化需用制备柱分离；第四组分用硅胶柱分离，乙酸乙酯/甲醇/水(8∶1∶1)洗脱，进一步纯化需用制备柱分离；步骤9.制备柱分离将每一组分的分离液各自合并，浓缩5～10倍，0.45μm膜过滤后，进入HPLC 9.4×250mm Zorbax ODS制备柱分离。