[发明专利]一种增加间隔臂的2，4－滴合成抗原的制备方法

摘要

本发明涉及一种增加间隔臂的2，4－滴合成抗原的制备方法，属于小分子环境污染物免疫检测领域，包括两种方法：其一，先合成2，4－滴和具有C3链或者C6链的分子(如L－赖氨酸)的缩合物，然后再和载体蛋白交联；其二，在载体蛋白表面连接具有C3链或者C6链的分子(如β－丙氨酸、ε－氨基己酸或者L－赖氨酸)，然后将2，4－滴的羧基与充当间隔臂分子的氨基缩合。本发明能使2，4－滴分子充分暴露在载体蛋白分子表面，以便获得特异性强、亲和力好的2，4－滴抗体。这种方法可以刺激动物的免疫系统地产生2，4－滴的特异性抗体含量更高的多克隆抗体。所产生的多克隆抗体能应用于水体或者饮用水中的2，4－滴的常规检测。

主权项

1、一种增加间隔臂的2，4-滴合成抗原的制备方法，其特征在于，先合成2，4-滴和具有C3链或者C6链的分子的缩合物，然后再和载体蛋白交联；包括以下步骤：1)按质量比(0.5～1.2)∶1将叔丁氧羰基-赖氨酸与2，4-滴混合溶于缓冲溶液PBS中，调节pH为5.5～6.5；2)缓慢加入与2，4-滴质量比为(0.5～1)的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺，于室温20℃～30℃条件下反应1～3小时；3)制备HCl/乙酸乙酯溶液：在吸滤瓶中放入固体NH4Cl，缓慢加入98％浓H2SO4，产生的HCl气体经硫酸洗瓶和CaCl2干燥塔干燥后通入冰冷却的乙酸乙酯中，将获得的溶液密封保存于4℃冰箱中；4)将2，4-滴与叔丁氧羰基-赖氨酸的缩合产物在50℃～70℃下用旋转蒸发器干燥，产物溶于乙酸乙酯中，于0℃下与第3)步制备的HCl/乙酸乙酯溶液混合，脱除赖氨酸的氨基保护叔丁氧羰基，0℃～4℃反应2～3小时后收集沉淀，并用预冷的乙酸乙酯反复洗涤；5)采用强酸性阳离子交换树脂去除自身环化的赖氨酸单体，获得纯化的2，4-滴和赖氨酸ε-氨基的交联物；6)按照载体蛋白：2，4-滴为(0.35～0.7)∶1将载体蛋白和纯化后的缩合物混合溶解在PBS溶液中，调节pH为5.5～6.5；7)再次缓慢加入与2，4-滴质量比为0.5～1的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺，并且轻轻搅拌均匀后于0℃～4℃静置12小时以上，反应产物溶液经0.1M的NaHCO3水溶液透析，然后再用pH7.2的PBS透析，将获得的产物溶液分装冻存。