[发明专利]利用非人哺乳动物乳腺生物反应器生产乙型肝炎疫苗的方法

摘要

本发明属于一种利用非人哺乳动物乳腺生物反应器生产乙型肝炎疫苗的方法。本发明将乙肝表面抗原蛋白基因，通过转染体细胞的方法，将乙肝表面抗原蛋白基因转入哺乳动物的基因组内，而在乳汁中特异高效表达乙肝表面抗原蛋白，从而一方面可以在饮用动物乳汁的时候达到免疫的目的；另一方面，可以从乳汁中提取乙肝表面抗原蛋白，制备注射性免疫制剂，达到对乙型肝炎的预防和治疗的目的。

主权项

1、一种利用非人哺乳动物乳腺生物反应器生产乙型肝炎疫苗的方法，其特征在于该方法包括下列步骤：(1)选用哺乳动物的乳蛋白基因为转基因的调控区和表达框架，在乳蛋白基因的表达框架上建立一个唯一的酶切位点，然后将乙肝表面抗原蛋白基因连接在乳蛋白基因的表达框架上，转基因载体的末端再连接一个筛选基因；(2)所构建的载体经DNA序列分析，确定乙肝表面抗原蛋白基因与乳蛋白基因的DNA序列，并与乳蛋白基因本身的表达和功能基因的氨基酸组成一致；(3)用电穿孔或脂质体诱导的方法将乙肝表面抗原蛋白基因载体转入体细胞中；(4)在培养基中对细胞株进行筛选，获得筛选后的阳性细胞株；一部分细胞冷冻保存，一部分细胞用于制备DNA；(5)阳性细胞株的DNA，经PCR和Southern杂交分析，确定含有乙肝表面抗原蛋白基因的细胞株；(6)转基因的细胞株的细胞移入成熟的去核卵母细胞的卵周隙内，然后使供核细胞和去核卵母细胞融合；(7)将克隆胚胎移植到寄母羊中，获得转基因克隆羊；(8)检测转乙肝表面抗原蛋白基因动物的乳汁中的乙肝表面抗原蛋白含量；(9)含有乙肝表面抗原蛋白的乳汁中的乙肝表面抗原蛋白的提纯。