[发明专利]高效表达乙肝表面S（主蛋白）和前S1（大蛋白）融合抗原的转基因哺乳动物细胞系

摘要

在乙肝表面抗原PreS1(21－47)基因片段与S基因的第223位相连的基础上，在其下游引入RNA加聚A信号AATAA、乙肝病毒增强子1(En1)和增强子2(En2)，及突变的x基因(mX)构成pCHBSS1G质粒。将pCHBSS1G质粒与pSV2dhfr质粒转化到CHO－dhfr－细胞，经克隆加MSX及MTX筛选扩增，获得了高效表达乙肝表面抗原S和前S1融合蛋白的一系列基因工程细胞系(GdSS1－X)，SS1融合蛋白在SDS－PAGE中显出27KD蛋白条带，同时可出现30KD蛋白条带，小鼠免疫可产生针对S和S1的特异性抗体。

主权项

1.一种含有乙肝病毒adr亚型表面抗原S+S1融合基因的重组质粒pCHBSS1G，此质粒的结构特点是：复制方向从左至右，其排列顺序是PBR322的复制起点→CMV-1E的0.75kb的启动子→乙肝表面抗原S+S1融合基因SS1→增强子EN1，En2及使用缺失突变使X基因自ATG后第8位bp起缺失16个bp，从而失去表达X基因的可能，降低致癌性→SV40的复制起点，早期启动子→GS基因，此基因是从CHO-dhfr-细胞中经PCR获得的→SV40的多聚A位点；质粒结构中的乙肝表面抗原S+S1融合基因SS1在前，谷氨酰胺合成酶扩增基因GS在后，它们是分别在CMV立即早期启动子及SV40早期启动子的调控之下；乙肝表面抗原S+S1基因是前S1第21-47基因片段与S基因3’端的第223位相连的融合基因。