[发明专利]耐热化α－葡聚糖磷酸化酶(GP)的方法

摘要

通过修饰天然α－葡聚糖磷酸化酶获得的耐热化α－葡聚糖磷酸化酶；和制备所述耐热化α－葡聚糖磷酸化酶的方法。所述天然α－葡聚糖磷酸化酶来源于植物。与天然α－葡聚糖磷酸化酶比较，耐热化α－葡聚糖磷酸化酶在选自下组的至少一个位置具有不同的氨基酸残基：对应基序序列1L或1H的4－位的位置、对应基序序列2的4－位的位置和对应基序序列3L或3H的7－位的位置，并且在20mM柠檬酸盐缓冲液(pH6.7)中在60℃加热10分钟以后，所述耐热化α－葡聚糖磷酸化酶在37℃的酶活性是加热之前所述耐热化α－葡聚糖磷酸化酶在37℃的酶活性的20％或更多。

主权项

1.耐热化α-葡聚糖磷酸化酶，其通过修饰天然α-葡聚糖磷酸化酶获得，其中所述天然α-葡聚糖磷酸化酶来源于植物，并且所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶选自下组的至少一个位置具有与所述天然α-葡聚糖磷酸化酶不同的氨基酸残基：对应基序序列1L：H-A-E-F-T-P-V-F-S中第4位的位置或对应基序序列1H：H-A-Q-Y-S-P-H-F-S中第4位的位置；对应基序序列2：A-L-G-N-G-G-L-G中第4位的位置；和对应基序序列3L：R-I-V-K-F-I-T-D-V中第7位的位置或对应基序序列3H：R-I-V-K-L-V-N-D-V中第7位的位置；并且其中在20mM柠檬酸盐缓冲液(pH6.7)中60℃加热10分钟后，所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在37℃的酶活性是加热之前所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在37℃酶活性的20％或更多。