[发明专利]扩增核酸的方法

摘要

当模板核酸具有彼此基本相同的序列时，在这些序列之间的区域中设计了引物，从而产生具有序列梯结构的产物，其中通过ICAN反应中的相同序列，靶区域在单一序列中聚合。通过采用嵌合寡核苷酸引物和含有特定碱基序列的形成序列梯的寡核苷酸引物，可以主动形成具有序列梯结构的扩增产物，从而可以提高ICAN反应的灵敏度、扩增效率和反应速度。

主权项

1.扩增核酸的方法，该方法包括以下步骤：(A)制备选自下组的反应混合物：(a)作为模板的核酸、脱氧核糖核苷三磷酸、具有链置换活性的DNA聚合酶、至少两种嵌合寡核苷酸引物、至少一种形成序列梯的寡核苷酸引物和RNA酶H；或(b)作为模板的核酸、脱氧核糖核苷三磷酸、具有链置换活性的DNA聚合酶、至少两种嵌合寡核苷酸引物和RNA酶H；其中嵌合寡核苷酸引物之一作为形成序列梯的寡核苷酸引物，其中每一种嵌合寡核苷酸引物含有核糖核苷酸和选自脱氧核糖核苷酸和核苷酸类似物的至少一种物质，并且所述核糖核苷酸位于引物的3′末端或3′末端侧，其中所述嵌合寡核苷酸引物至少包含第一嵌合寡核苷酸引物和第二寡核苷酸引物，所述第一嵌合寡核苷酸与作为模板的核酸的核苷酸序列互补，所述第二嵌合寡核苷酸引物与作为模板的核酸的核苷酸序列同源，并且其中形成序列梯的寡核苷酸引物具有与作为模板的核酸的一个区域和/或所述区域下游的核苷酸序列互补的序列，所述区域与第一嵌合寡核苷酸引物互补，并且所述形成序列梯的寡核苷酸引物在其5′侧具有与以下序列互补的序列：第二嵌合寡核苷酸引物5′侧的、与作为模板的核酸同源的核苷酸序列；作为模板的核酸的一种核苷酸序列，该核苷酸序列相应于与第二嵌合寡核苷酸引物同源的部分的5′末端上游的区域；或这两者；以及(B)在恒温条件下将反应混合物温育足够的时间以产生序列梯样扩增产物，在所述条件下发生引物与作为模板的核酸的特异性退火、通过DNA聚合酶合成延伸链的反应和链置换反应、以及通过RNA酶H切割延伸链的反应。