[发明专利]肠出血性大肠杆菌的志贺菌毒素家族基因的检测试剂

摘要

本发明提供了优选用于肠出血性大肠杆菌(EHEC)的2型志贺菌毒素家族基因(stx)的快速和特异性基因检测试剂的寡核苷酸的组合。更具体地，本发明提供了用于检测EHEC的stx2 RNA的方法，所述方法通过使用具有与EHEC的stx2基因特异的碱基序列同源或互补的并且位于基因型之间无变化的位点之间的序列引物以及结合stx2 RNA的特定位点的寡核苷酸而仅特异扩增stx2 RNA。

主权项

1.用于检测样品中存在的肠出血性大肠杆菌的2型志贺菌毒素家族基因(stx2)的检测试剂，该试剂用于使用RNA扩增过程的检测方法，所述检测方法包括步骤：使用来自stx2的RNA的特定序列作为模板，以及具有与所述特定序列同源的序列的第一引物，和具有与所述特定序列互补的序列的第二引物，用RNA依赖的DNA聚合酶产生cDNA，从而形成双链RNA-DNA，其中第一引物或者第二引物具有这样的序列，其中RNA聚合酶的启动子序列已经被添加到该引物的5’末端；通过核糖核酸酶H降解所述双链RNA-DNA的RNA部分，从而产生单链DNA；和使用所述单链DNA作为模板用DNA依赖的DNA聚合酶产生具有所述启动子的双链DNA，其中所述启动子能够转录为由所述RNA特定序列组成的RNA，或转录为与所述RNA特定序列互补的序列；其中，双链DNA在RNA聚合酶存在下产生RNA转录产物，所述RNA转录产物作为随后用RNA依赖的DNA聚合酶进行cDNA合成的模板；该试剂包含第一引物和第二引物，其中第一引物为由SEQ.ID No.1所示序列的至少10个相邻碱基组成的寡核苷酸，或者为这样的寡核苷酸，其中由SEQ.ID No.1所示序列的至少10个相邻碱基组成的寡核苷酸中的一个或多个核苷酸被缺失、替换或者添加并且能够特异结合与该特定序列互补的序列；第二引物为由SEQ.ID No.2所示序列的至少10个相邻碱基组成的寡核苷酸，或者为这样的寡核苷酸，其中由SEQ.ID No.2所示序列的至少10个相邻碱基组成的寡核苷酸中的一个或多个核苷酸被缺失、替换或者添加并且能够特异结合所述特定序列。