[发明专利]鲟科鱼类卵黄磷蛋白的制备方法及其应用

摘要

鲟科鱼类卵黄磷蛋白的制备方法及其应用，它涉及用于鉴别鲟科鱼类雌雄的卵黄磷蛋白的制备方法及通过使用卵黄磷蛋白鉴别鲟科鱼类雌雄的方法。鉴于国内还没有建立使用鲟科鱼类卵黄磷蛋白来检测鲟科鱼类卵黄蛋白原的免疫学方法，国外只建立少数鲟科鱼类的酶联免疫法，本发明按照下述步骤进行制备：一、取鲟科鱼类的卵，低温高速匀浆和低温离心后，经饱和硫酸铵沉淀，凝胶柱分离纯化，透析除盐后，制备卵黄磷蛋白冻干粉；二、称取冻干粉，溶于生理盐水中，加入弗氏佐剂乳化，免疫大白兔，制备多克隆抗体，它可以用于鉴别鲟科鱼类雌雄。本发明具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、成本低等优点。

主权项

1、鲟科鱼类卵黄磷蛋白的制备方法，其特征在于所述鲟科鱼类卵黄磷蛋白检测方法的建立按照下述步骤进行制备：一、鲟科鱼卵黄磷蛋白提取液的制备：①称取鲟科鱼卵5g加入15ml预先预冷的0.02mol/l、pH＝8.0的Tris-HCl缓冲液，高速匀浆，离心分离，弃沉淀，留上清液；②上清液通过凝胶色谱柱洗脱；③收集含卵黄磷蛋白的洗脱液，透析除盐，得到卵黄磷蛋白提取液；二、鲟科鱼卵黄磷蛋白多克隆抗体的制备：①将鲟鱼卵黄磷蛋白提取液冷冻干燥为冻干粉，称取1mg的卵黄磷蛋白冻干粉溶于1ml生理盐水中，加入1ml弗氏完全佐剂，低温下乳化，动物皮下多点注射，进行初次免疫；②第28、38、48天各背部皮下多点加强免疫一次，免疫剂量同第一次，采用弗氏不完全佐剂乳化抗原溶液；③55天后，动物耳缘抽取少量血液测定抗体效价；④心脏采血制备鲟科鱼卵黄磷蛋白抗血清。