[发明专利]一种反硝化细菌直接倍比稀释PCR快速定量检测方法无效
| 申请号： | 200510010454.8 | 申请日： | 2005-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN1769471A | 公开（公告）日： | 2006-05-10 |
| 发明（设计）人： | 马放;魏利 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨工业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/25 | 分类号： | C12Q1/25;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 哈尔滨市松花江专利商标事务所 | 代理人： | 岳泉清 |
| 地址： | 150090黑龙江省哈尔滨*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 一种反硝化细菌直接倍比稀释PCR快速定量检测方法，它涉及一种反硝化细菌的检测方法。它解决了以往检测反硝化细菌的方法繁琐，不能定量检测，检测时间长，无法为生产和科学研究提供有效和即时的数据，检测费用高的问题。它通过以下步骤实现：(一)菌体的制备；(二)将制备的菌体在冰上进行倍比稀释；(三)倍比稀释液在冰上进行PCR操作；(四)采用三管或五管平行法；(五)PCR扩增；(六)1.0％的琼脂糖电泳检测；(七)观察结果，记数、查表计算得出结论。本发明中经倍比稀释的反硝化细菌直接进行PCR检测，方法简单，可定量检测，检测时间短，检测费用低，并且可以即时、准确的提供数据用于生产和科学研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 硝化细菌 直接 稀释 pcr 快速 定量 检测 方法 | ||
【主权项】：
1、一种反硝化细菌直接倍比稀释PCR快速定量检测方法，其特征是它通过以下步骤实现：(一)菌体的制备；(二)将制备的菌体在冰上进行倍比稀释；(三)倍比稀释液在冰上进行PCR操作；(四)采用三管或五管平行法；(五)PCR扩增；(六)1.0％的琼脂糖电泳检测；(七)观察结果，记数、查表计算得出结论；所述的步骤(三)中PCR的反应体系为20μL由2μL Buffer(10×)，2μL dNTP，1μL 0.1μmol/L的特意引物I DNBF：5’-GC[T/C][C/T]ACCAAG[G/C]CGACGATC-3’共19bp、1μL 0.1μmol/L的特意引物II DNBR：5’-ACCAGGGTATCTAATCCTG-3’共19bp、0.3U rTaq酶、11.7μL去离子水和2μL经梯度稀释的样品组成。
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