[发明专利]一种雪莲紫丁香甙的制备方法

摘要

一种雪莲紫丁香甙的细胞培养生产方法，该方法步骤涉及：采用雪莲外植体或用种子萌发幼苗在1/2MS培养基上诱导愈伤组织，该愈伤组织细胞用于生产雪莲紫丁香甙；产雪莲紫丁香甙细胞的固体或悬浮培养使用的培养基是MS培养基；用70％乙醇或正丁醇进行雪莲细胞培养物紫丁香甙的分离、提取和制备；用HPLC测定紫丁香甙含量。本方法的细胞培养物中总紫丁香甙化合物的含量为细胞干重的3－4％，紫丁香甙生产率为400－900mg/L。

主权项

1.一种雪莲紫丁香甙的细胞培养生产方法，主要步骤是：a)采用雪莲外植体或用种子萌发幼苗，在含有浓度为0.01-3.0mg/L激素的1/2MS培养基上诱导愈伤组织；b)愈伤组织在含上述浓度激素的MS培养基上继代培养，获得雪莲紫丁香甙细胞系；c)雪莲紫丁香甙细胞接种于含有浓度为0.01-3.0mg/L激素的MS培养基中，加入0.6-0.8重量％的琼脂，灭菌前pH值为5.8，接种量为50±1g·FW/L；接种后放入光培养室中，温度为25±2℃进行固体培养；或雪莲细胞接种于含有浓度为0.01-3.0mg/L激素的MS培养基中，灭菌前pH值为5.8，接种量为50±1g·FW/L，接种后放入光培养室中，温度为25±2℃，摇床转速80-110r/min进行悬浮液体培养；d)收集步骤c得到的雪莲细胞培养物，置于干燥器中，室温至40℃烘干至恒重，粉碎成16-24目的粉状，用乙醇或正丁醇浸泡16-24小时，沉淀取上清液，得到含紫丁香甙的提取液；所述的激素为α-奈乙酸、吲哚乙酸、6-苄基嘌呤、激动素或/和2，4-二氯苯氧乙酸。