[发明专利]PAT蛋白的亲和层析－酶联免疫检测方法及其专用试剂盒

摘要

本发明涉及一种PAT蛋白检测方法，更确切地说它是利用免疫亲和层析柱及酶联免疫吸附方法来检测转bar和pat基因作物及其加工产品中的PAT蛋白，属于免疫学和食品安全检测技术领域。本发明的方法是：以PAT蛋白为抗原进行动物免疫，获得了特异性的多克隆抗体；将此抗体交联到琼脂糖凝胶上，制备免疫亲和层析柱。被检样品经处理后，通过亲和柱以富集其中的PAT蛋白；收集亲和柱的洗脱液进行酶联免疫吸附检测，以确定其中的PAT蛋白含量。本发明还提供了所述方法的专用试剂盒。

主权项

1、一种利用免疫亲和层析和酶联免疫吸附检测样品中PAT蛋白的方法，包括步骤：(1)样品前处理；(2)制备酶标抗原：将活化的辣根过氧化物酶与纯化的PAT蛋白混合，制备酶标抗原；(3)制备PAT抗体；(4)制备偶联PAT抗体的凝胶；(5)包被酶标板；(6)免疫亲和层析纯化：将偶联抗体的凝胶装柱，加入样品过柱，洗脱，收集洗脱液；(7)酶联免疫吸附检测：将洗脱液加入经抗体包被的酶标板上，温育后洗涤拍干；加入酶标抗原，温育后洗涤拍干；显色、终止；用酶标仪读取OD值；(8)绘制标准曲线；(9)根据标准曲线对洗脱液中的PAT蛋白含量进行定量计算。