[发明专利]制备型横向电场的体积排阻电色谱分离生物大分子的方法

摘要

本发明公开了一种在交变电场作用下利用体积排阻电色谱分离蛋白质等生物大分子的色谱分离方法。所述的制备型电色谱分离设备包括凝胶室和两侧的电极室构成，采用该设备分离生物大分子的方法，其特征在于：配制乙酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐或三羟甲基氨基甲烷－盐酸缓冲液为流动相；流动相平衡后的凝胶室中用重力填充方法填充凝胶；流动相流速为10－200cm/h，温度为2－25℃；在凝胶室两侧施加电极电压为1－600伏、电流交变周期为2－200秒的等周期交变电场，电极液流速为20－400cm/h，温度为4－25℃；样品以用脉冲方式进样。本发明的方法具有分离能力强、处理量大和适用范围广等优点，在蛋白质、核酸等生物大分子的分离与纯化中具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种利用制备型横向电场的体积排阻电色谱分离生物大分子的方法，所采用的制备型横向电场电色谱分离设备，所述的横向电场是指电场方向与液体流动方向垂直，电色谱包括凝胶室和两侧的电极室构成，凝胶室是两侧有对称的槽沟、槽沟内平台上有密封凹槽和中间为长方形中空的有机玻璃体；槽沟内设置具有截留分子量大于1000道尔顿的、可自由通过导电离子的膜板；在凝胶室外两侧各有一个电极室；电极室内壁固定惰性铂电极；电极室与凝胶室中充有包括乙酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐或三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液；采用该设备分离生物大分子的方法，其特征在于，包括以下过程：配制含有0-100mmol/L氯化钠的1.0-20mmol/L乙酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液为流动相和电极液，流动相使用前经0.45μm超滤膜和超声处理；生物大分子溶于流动相中制备成浓度为0.1-100mg/ml的溶液；凝胶室和两侧的电极室用流动相平衡后，将Sephadex G-75或Spharose FF凝胶按重力填充的方法填充到电色谱柱的凝胶室；流动相流速为10-200cm/h，温度为2-25℃；在凝胶室两侧施加电极电压为1-600伏、电流交变周期为2-200秒的等周期交变电场，电极液流速为20-400cm/h，温度为4-25℃；待系统稳定后，待分离的样品以脉冲方式进样，色谱柱流出液经检测器检测。