[发明专利]一种组织工程骨软骨复合物制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种组织工程骨软骨复合物制备方法及其应用，用组织工程的方法分别构建骨和软骨复合物，然后用一种黏性产物将这两部分粘接起来，将成骨的部分做成一个楔子，插入损伤部位深处，使其可以牢固的固定在损伤局部，同时进行骨和软骨的修复。本发明是一种应用多潜能干细胞构建优良的组织工程骨软骨的方法，同时可以解决组织工程修复关节软骨缺损方法中组织工程复合物容易脱落的难题。

主权项

1、一种组织工程骨软骨复合物制备方法，包括以下步骤：1)应用淋巴细胞分离液密度梯度离心的方法体外分离和扩增骨髓多潜能干细胞BMSCs，当BMSCs第2-3代达到汇合后，消化，计数，按照3×107 -6×107/100mm2的密度接种，分别用不同的软骨和成骨的诱导体系来进行初步的软骨和骨起源的诱导；2)取新西兰兔新鲜的髂骨、膝关节，进行脱钙处理，制备脱钙骨基质；3)然后分别将脱钙骨基质和I型胶原海绵切成所需大小的立方体支架，预先包被人纤维连接蛋白并干燥过夜；4)将步骤1中培养在不同诱导体系中的BMSCs分别接种到步骤3中制备的脱钙骨基质支架和I型胶原支架中，接种了细胞的材料置于培养箱中孵育1-2h；5)将接种了细胞的支架表面直接用无菌医用纱布擦干，按照修复的结构将两种支架放于一个合适大小的模子中，中间留有缝隙，分别滴加5-10μl纤维蛋白溶液形成一个薄膜，然后再滴加等体积的凝血酶溶液中，让这两个成分之间发生反应，在5-10秒中之内形成凝胶；6)将两种支架细胞复合物轻轻的挤压，促进这两种材料紧密的接触；这种复合移植物放于37℃，30min后用于关节软骨缺损的修复。