[发明专利]“植物－微生物”联合定向修复五氯酚污染土壤的方法

摘要

“植物－微生物”联合定向修复五氯酚污染土壤的方法，首先筛选出特异性的能高效降解PCP污染物的降解菌，然后对其菌种及降解特性进行实验研究，选择最适条件培养。培养后菌液与灭菌并且添加了不同浓度污染物的受试土壤混合后，作为盆栽碱蓬的实验用土。在碱蓬的不同生长时期取土样测定其中PCP残留量。特点是：有碱蓬种植并且其种子经PCP降解菌菌液浸泡，土壤中混有菌液的受试样的PCP降解率最高，低浓度PCP(5mg/kg)的降解率可达94.73％。接种特异性PCP降解菌同时种植碱蓬，两者结合，对土壤修复作用的功效要大于单纯接种特异性PCP降解菌或种植碱蓬效果，可以达到最佳的PCP降解效果。

主权项

1、一种“植物—微生物”联合定向修复五氯酚污染土壤的方法，其特征在于：(一)筛选特异性污染物降解菌Psendomonasa sp.和Bacillus sp.针对受损土壤的污染物为氯酚类物质中的五氯酚PCP，筛选降解菌的过程包括采样、富集培养、驯化、分离；(1)富集培养取沿海岸受PCP污染严重地区的泥样，接入PCP富集培养基中，富集培养；待培养基浑浊后，得到活化污泥原液；(2)驯化将活化的污泥原液接入PCP富集培养基中振荡培养，在检测到PCP降解后，加入无菌玻璃石棉，继续培养一段时间后，静置，弃去上清液；在下层污泥中再加入含PCP的富集培养基，同上培养，直至PCP降解；这样反复驯化下层污泥，并逐渐增加培养基中PCP的含量，使得污泥中的PCP降解菌不断被富集；(3)分离在以PCP为唯一碳源，含有溴百里酚蓝的固体培养基上筛选周边变成黄色的菌落，转板划线分离，再回接到添加了溴百里酚蓝的PCP分离培养基中，经培养后，挑选培养基由蓝色变成黄色，并且较为浑浊的培养样品涂布于含高浓度PCP的平皿中；重复以上过程，获得高效降解PCP的菌株；最终筛选出两株高效PCP降解菌P5、P9，P5为Psendomonas sp.P9为Bacillus sp.；在筛选的起始阶段培养基中添加的PCP浓度较低，为50mg/l，驯化阶段逐渐增加PCP浓度，直至500mg/l，并且为了适应高含盐环境，在筛选的无机盐培养基中添加1％的氯化钠；在平板分离过程中，选取长势较快并且经回试仍有较强PCP降解能力的菌种；以上其中：无机盐培养基：K2HPO4 1.73g； KH2PO4 0.68g； NH4NO3 1.0g； CaCl2·2H2O 0.02g； MnSO4·H2O 0.03g； MgSO4·7H2O 0.1g； FeSO4 0.03g； NaCl 10g； 水 1000ml； PH 7.4富集培养基：在无机盐培养基中添加一定浓度的PCP作碳源，另加入0.5g/l的酵母粉作生长因子和补充碳源；分离培养基：在无机盐培养基中添加一定浓度的PCP作唯一碳源；(二)碱蓬——特异性PCP降解菌联合修复污染土壤将PCP高效降解菌的混合菌液与滨海高含盐含PCP土壤混合，并在其混合土壤上栽种碱蓬：灰绿碱蓬suaeda.glanca bunge和盐地碱蓬S.salsa(L.)Pall，即可达到修复污染土壤。