[发明专利]以大孔阴离子树脂固定化氨基酰化酶的方法

摘要

本发明公开了一种以大孔阴离子树脂固定化氨基酰化酶的方法，属于固定化氨基酰化酶的技术。该方法包括以下过程，将以大孔阴离子树脂溶于0.05mol·l^－1－0.15mol·1^－1浓度的不同的酸溶液中，分别转型为Ac^－、Cl^－、SO₄^2－或NO₃^－型载体；将氨基酰化酶用去离子水稀释至比酶活为80－180U·ml^－1，用NaOH溶液调节pH值至5－10；将转型的树脂加入到游离酶溶液中，在20－45℃下，经振荡、抽滤后；放入去离子水中继续振荡抽滤；然后用醋酸钠溶液浸泡，抽滤；最后用去离子水洗涤，直至洗出液中无酶活力，抽滤至干，得到固定化氨基酰化酶。本发明操作简单，固定化酶具有良好的机械性能和化学稳定性，比酶活可达到1800U·ml^－1，酶活回收率大于60％。此固定化氨基酰化酶可广泛用于氨基酸的拆分。

主权项

1.一种以大孔阴离子树脂固定化氨基酰化酶的方法，其特征在于包括以下过程：1).以大孔阴离子树脂DEAE-E/H、D380或D392为载体，载体在0.05mol.l-1-0.15mol.l-1浓度的醋酸溶液、盐酸溶液、硫酸溶液或硝酸溶液中经室温下处理，分别转型为Ac-、Cl-、SO42-或NO3-型载体，转型后载体用去离子水充分洗涤，备用；2).将氨基酰化酶用去离子水溶解，稀释至比酶活为80-180U.ml-1，用NaOH溶液调节pH值至5-10；3).将1g经步骤1转型的树脂加入到10-20ml经步骤2制备的游离酶溶液中，在20-45℃下，以100-200rpm的转速振荡3-5h后取出，静置抽滤；放入去离子水中继续振荡抽滤；然后用0.1mol.l-1的醋酸钠溶液浸泡，并以振荡0.5h，抽滤；最后用去离子水洗涤，直至洗出液中无酶活力，抽滤至干，得到固定化氨基酰化酶。