[发明专利]重组人PSP94蛋白在大肠杆菌中分泌表达的方法无效
| 申请号： | 200510016627.7 | 申请日： | 2005-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN1673377A | 公开（公告）日： | 2005-09-28 |
| 发明（设计）人： | 田长生;高瑞娟;李扬;赵丹;刘喜春;赵雪俭 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/12 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 | 代理人： | 魏征骥 |
| 地址： | 130021*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种重组人PSP94蛋白在大肠杆菌中分泌表达的方法，属于采用大肠杆菌分泌表达有生物活性的人PSP94蛋白的方法。提取前列腺组织总RNA，通过RT－PCR方法钓取中国人PSP94 cDNA序列，插入克隆载体pUC19中，PCR粗筛后进行序列测定；将双酶切后的PSP94蛋白编码基因、信号肽和pBV220质粒进行连接，构建重组质粒pBV－PSP94；阳性重组质粒pBV－PSP94分别转化大肠杆菌菌株，蛋白诱导表达最适温度为40℃，最佳表达时间为5小时。本发明的有益效果是，通过分子生物学技术，突变分泌表达载体的信号肽，在信号肽上引入酶切位点，克服了传统分泌表达载体在表达的蛋白前添加多余氨基酸的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 psp94 蛋白 大肠杆菌 分泌 表达 方法 | ||
【主权项】：
1、一种重组人PSP94蛋白在大肠杆菌中分泌表达的方法，包括下列步骤：一、PSP94cDNA的克隆扩增提取前列腺组织总RNA，通过RT-PCR方法钓取中国人PSP94cDNA序列，插入克隆载体pUC19中，PCR粗筛后进行序列测定；二、重组分泌型表达载体的构建将双酶切后的PSP94蛋白编码基因、信号肽和pBV220质粒进行连接，构建重组质粒pBV-PSP94；三、重组PSP94蛋白表达阳性重组质粒pBV-PSP94分别转化大肠杆菌菌株，如JM109、HB101、或LB21菌株，经摸索蛋白诱导表达最适温度为40℃，最佳表达时间为5小时。
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