[发明专利]禽流感病毒基质蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表达制备

摘要

一种禽流感病毒基质蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表达制备方法，属于生物技术领域，特别是涉及一种AIV融合抗原蛋白及制备。本发明提供一种由两种AIV抗原蛋白组成的融合抗原蛋白，能有效检测致病率很高的A型禽流感病毒基质蛋白及核蛋白的抗体的禽流感病毒基质蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表达制备。本发明首先构建质粒pPIC9K－M－Np，然后M－Np蛋白毕赤酵母真核表达及制备。本发明开展了利用毕赤酵母真核表达系统表达制备的M－Np融合抗原蛋白的研究。其表达量高、特异性强、易于纯化、具有完整的空间构象等特点完全符合ELISA快速检测试剂盒的鉴定要求。

主权项

1、一种禽流感病毒基质蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表达制备方法，其特征在于：首先构建质粒pPIC9K-M-Np：将pMD18-T-M质粒由EcoR I、EcoRV双酶切并回收；pMD18-T-Np质粒由EcoR I、EcoRV双酶切并回收；将以上回收产物经T4连接酶连接后即获得中间质粒pMD18-T-M-Np；pMD18-T-M-Np经EcoR I、Not I双酶切并回收；pPIC9K质粒由EcoR I、Not I双酶切并回收；将以上回收产物经T4连接酶连接后即获得目的质粒pPIC9K-M-Np；然后M-Np蛋白毕赤酵母真核表达及制备：用Bpu1102I线性化pPIC9K-M-Np重组质粒；线性化后将其电转化至GS115感受态中，在MD平板中培养，而后挑取单个菌落于YPD培养基中复苏，提重组体基因组进行PCR鉴定，筛选出的阳性菌株于BMGY培养基中摇菌，离心后转至BMMY培养基中开始甲醇诱导，产物离心后取上清，加入饱和硫酸铵沉淀蛋白，离心收集即得M-Np抗原蛋白。