[发明专利]H9亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白

摘要

一种H9亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制备方法，属于生物技术领域，特别是涉及一种AIV亚型抗原蛋白——H9HA蛋白。本发明提供一种AIV关键的抗原蛋白H9亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白。本发明首先构建质粒pPIC9K－H9HA，然后进行H9HA蛋白真核表达及制备即得到H9HA抗原蛋白。本发明开展了利用毕赤酵母真核表达系统表达制备用于HPAIV ELISA快速检测的抗原蛋白的研究。以H9HA为研究对象，成功获得了针对H9HA抗体的抗原蛋白，经SDS－PAGE、间接ELISA检测，具良好生物活性。其表达量高、特异性强、易于纯化、具有完整的空间构象等特点完全符合ELISA快速检测试剂盒的鉴定要求。

主权项

1、一种H9亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制备方法，其特征在于：首先构建质粒pPIC9K-H9HA：将pMD18-TH9HA质粒由BamH I、HindIII双酶切，经补平后回收得到目的片段；pPIC9K质粒由EcoR I线性化，两端分别补平、去磷后回收；将以上回收产物经T4连接酶连接后即获得目的质粒pPIC9K-H9HA。然后进行H9HA蛋白真核表达及制备：用SacI线性化pPIC9K-H9HA重组质粒；线性化后将其电转化至GS115感受态中，在MD平板中培养，而后挑取单个菌落于YPD培养基中复苏，提重组体基因组进行PCR鉴定，筛选出的阳性菌株于BMGY培养基中摇菌，离心后转至BMMY培养基中开始甲醇诱导，产物离心后取上清，加入饱和硫酸铵沉淀蛋白，收集蛋白进行进一步纯化即得到H9HA抗原蛋白。