[发明专利]轮状病毒Vp6基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组与表达

摘要

一种轮状病毒Vp6基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组与表达，属于生物基因领域，其特征是：将克隆质粒和以thyA基因为选择压力的载体均以SacI、KpnI双酶切，纯化回收后，以T4 DNA连接酶连接，连接产物转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coli X13中，在培养基上培养，经生长功能弥补，筛选获得原核重组表达质粒；将阳性菌用苏氨酸诱导表达，重组质粒获得高效表达，融合蛋白的相对分子量约为44.88kD。有益效果是：VP6蛋白为RV组特异性抗原，位于病毒的内壳，占病毒颗粒的51％。由于VP6主要刺激机体产生黏膜免疫抗体sIgA，在黏膜免疫中具有非常重要的作用，因而研制轮状病毒Vp6基因介导黏膜免疫的口服基因工程疫苗具有重要的意义。

主权项

1、一种轮状病毒Vp6基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组与表达，其特征是：轮状病毒Vp6基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组是：从培养的RV中用反转录聚合酶链式反应RT-PCR技术扩增Vp6基因，开放阅读框含1194bp，编码397个氨基酸，通过T-A克隆技术，将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-T载体中，获得重组克隆质粒pGEM-T-Vp6，以SacI和KpnI双酶切pGEM-T-Vp6和以胸苷酸合成酶基因thyA为选择压力的非抗生素抗性的可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的质粒载体pW425t，纯化回收后，以T4DNA连接酶连接，连接产物转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coli X13中，在普通的LB固体培养基(没有添加胸腺嘧啶)上培养，经生长功能弥补，筛选获得原核重组表达质粒pW425t-Vp6；轮状病毒Vp6基因与乳酸菌非抗性表达载体的表达是：将阳性菌用苏氨酸诱导表达，经SDS-PAGE电泳分析显示，重组质粒获得高效表达，融合蛋白的相对分子量约为44.88kD。