[发明专利]检测凝血酶、类凝血酶及凝血酶抑制剂的纤维蛋白原平板法

摘要

一种检测凝血酶、类凝血酶及凝血酶抑制剂的纤维蛋白原平板方法，使用琼脂糖与纤维蛋白原制作成纤维蛋白原琼脂平板，通过标准品及检品在该平板上的扩散反应作定量检测。本发明的检测凝血酶、类凝血酶及凝血酶抑制剂的纤维蛋白原平板法，操作简便、直观、稳定、敏感度高(检测到每毫升0.15酶活力单位)，不受检品浊度或颜色干扰，成本低廉。在普通实验室中只要有恒温箱即可实施，是一种易于推广使用的实验方法。

主权项

1.一种检测凝血酶、类凝血酶及凝血酶抑制剂的纤维蛋白原平板方法，利用纤维蛋白原为底物，其特征是步骤为：a.制板：将加热充分溶解的琼脂糖和用0.1M pH7.4磷酸缓冲液溶解的纤维蛋白原，以重量比容积为1∶1的比例混合，在平皿中灌板，冷却后即制成纤维蛋白原琼脂平板；b.打孔：纤维蛋白原琼脂平板冷却后，按一定间距打孔；c.标准品、检品的准备及加样反应：用0.05M pH7.4磷酸缓冲液溶解标准品，并稀释成系列浓度；用同样的缓冲液溶解检品并作适当稀释；将稀释后的标准品、检品分别在上述板孔中加样。平皿加盖后置37℃恒温扩散反应7-10小时；d.测量反应孔沉淀圈，绘制标准曲线，计算结果：在纤维蛋白原琼脂平板加样扩散反应后，可肉眼看到加样孔由内向外形成乳白色圆形沉淀圈，沉淀圈的大小与酶活力浓度成正相关；测量各标准品反应孔沉淀圈直径，在半对数坐标纸上绘制酶活力单位标准曲线；测量各检品反应孔沉淀圈直径，即可在标准曲线上查出其酶活力单位数，乘以检品的稀释倍数即为检品的实际酶活力单位数。