[发明专利]短芒披碱草转杀虫基因技术

摘要

本发明提供了一种短芒披碱草转杀虫基因的技术，按照本技术，以短芒披碱草成熟胚为外植体，进行了愈伤组织再生、农杆菌介导的杀虫基因转化及转基因植株的杀虫性研究，建立了高效的愈伤组织再生体系；进行了遗传转化条件的研究，获得的抗性愈伤组织以体细胞胚发生途径形成再生植株，经过分子鉴定和杀虫性实验，获得了杀虫转基因短芒披碱草植株。杀虫转基因短芒披碱草具有杀草地飞蝗特性，在我国草原畜牧业发展、防止草地沙化等方面有广阔的市场前景。

主权项

1、一种短芒披碱草杀虫转基因技术，包括(1)外植体制备；(2)所述外植体在含6.0mg/L2，4-D和0.05mg/L激动素的MS培养基上诱导愈伤组织，并继代培养2-3月之后，选择黄白色、颗粒状的胚性愈伤组织，在1/2MS+2，4·D6.0mg/L+100μM乙酰丁香酮+2％蔗糖+1％葡萄糖+1.0％琼脂粉，pH5.6的培养基上预培养3天，然后用含目标基因表达载体的农杆菌菌液浸染；(3)在含60mg/L潮霉素的选择压和500mg/L羧苄青霉素的所述培养基上筛选抗性愈伤组织并除去农杆菌；(4)在含2.0mg/LNAA和60mg/L潮霉素的所述培养基上诱导愈伤组织体细胞胚；(5)体细胞胚萌发，利用60mg/L潮霉素来筛选抗性转基因再生苗；(6)对转化后获得的抗性苗进行分子检测。