[发明专利]基于蛋白相互作用的Ryanodine受体活性鉴定方法

摘要

本发明涉及一种基于蛋白相互作用的Ryanodine受体活性鉴定方法，在接近生理离子强度下，在含有一定量的纯化RyR样品中加入RyR的激活剂，通过调控RyR的功能状态来调控RyR的不同构象和RyR－RyR之间的相互作用。而在溶液体系中，RyR相互作用的差异可以通过RyR聚集状态的改变灵敏地反映出来。因此将处于不同功能状态的RyR样品孵育一段时间后，可通过检测不同功能状态的RyR的聚集程度来检测RyR的活性。本发明方法实用性强，步骤简单，能对RyR的总体活性作出评价，而且不需要专门的检测设备，利用实验室多种常规仪器即能完成检测，具有推广价值。

主权项

1、一种基于蛋白相互作用的Ryanodine受体活性鉴定方法，其特征在于包括如下步骤：1)稀释纯化RyR：应用含28mM KCl-22mM NaCl，20mM Pipes，pH7.1的稀释溶液将RyR原液稀释10倍，得到用于测定RyR活性的样品，样品中含有5～20μg/ml RyR，130mM KCl-20mM NaCl，20mM Pipes，pH7.1；2)调控RyR活性：立即在稀释后的RyR样品中加入1-100μM Ca2+，或/和1-10mMAMP的RyR激活剂，立即混匀，使RyR处于激活状态；3)孵育RyR样品：经步骤2处理的RyR样品在20℃～25℃孵育30～60分钟，促进RyR聚集物的形成；4)检测RyR样品的聚集状态：对孵育后的样品，应用实验室常规手段观察不同活性状态下RyR的聚集状态。