[发明专利]分泌表达重组人表皮生长因子的大肠杆菌表达系统有效
| 申请号： | 200510025289.3 | 申请日： | 2005-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN1854294A | 公开（公告）日： | 2006-11-01 |
| 发明（设计）人： | 甘人宝;钱悦;朱俊;冯宝山;丁红珍;张倩;叶勤;张海毅 | 申请（专利权）人： | 甘人宝;钱悦;朱俊;冯宝山;丁红珍;张倩;叶勤;张海毅 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/70;C12P21/02;C07K1/14 |
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| 地址： | 200032上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供信号肽基因phoAspL10、表达质粒pBL10EGF、用表达质粒pBL10EGF转化的大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞及从中筛选出的工程菌株BE－2。进一步提供制备rhEGF的方法，即化学合成全新设计的phoAspL10基因及其与hEGF的串联基因，并以pBLGlu2为起始质粒构建表达质粒pBL10EGF，进而构建工程菌株BE－2，该菌株经发酵培养，直接分泌表达rhEGF至培养基中，分泌表达量达到384mg/l，分离纯化后，产品纯度大于95％，比活性大于1.0×106IU/mg蛋白。本发明方法特别是采用特温敏的PL强启动子串联全新设计的phoAspL10来表达rhEGF，使表达产物直接分泌至培养基中，而非在胞内形成包涵体或是将蛋白表达至细菌的周质中。产品rhEGF保留了天然的空间构象，生物活性高，不需要再经过蛋白复性。 | ||
| 搜索关键词： | 分泌 表达 重组 表皮 生长因子 大肠杆菌 系统 | ||
【主权项】：
1.信号肽基因phoAspL10，它具有序列表中SEQ ID NO：1所示序列。
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