[发明专利]巴士德毕赤酵母GS115/PFK－K5的高密度发酵方法

摘要

本发明涉及一种巴士德毕赤酵母GS115/PFK－K5的高密度发酵方法。本发明方法包括以下步骤：种子的培养、接种前准备及接种；补料生长阶段：该阶段包括补加甘油和组氨酸；甲醇诱导巴士德毕赤酵母表达PFK－K5：在补料生长阶段结束，即当菌体湿重达到180～220g/L时，停止补加甘油，当甘油彻底耗尽后，开始甲醇诱导，首次补加含PTM₁ 12ml/L的甲醇，同时添加5～12％组氨酸至使发酵液终浓度达到0.01～0.5％，待甲醇耗尽后，再次补加含PTM₁12ml/L的甲醇，如此诱导表达36～60小时后结束发酵；分离提取。采用本发明的巴士德毕赤酵母GS115/PFK－K5高密度发酵法，使巴士德毕赤酵母的菌体量和外源蛋白表达量均有大幅度提高。

主权项

1.巴士德毕赤酵母GS115/PFK-K5的高密度发酵方法，其特征在于该方法，包括以下步骤：(1)种子的培养、接种前准备及接种；(2)补料生长阶段：该阶段包括补加甘油和组氨酸：A.补加甘油：在发酵罐发酵过程中甘油耗尽时，即溶氧水平DO陡然上升时，开始补加含PTM1 12ml/L的50％甘油；如此反复直到菌体湿重量达到180～220g/L；B.补加组氨酸：在发酵罐发酵过程中，当溶氧水平DO开始缓慢上升时，添加浓度为5～12％组氨酸溶液至发酵液终浓度0.01～1％；(3)甲醇诱导表达阶段：在补料生长阶段结束，即菌体湿重达到180～220g/L，停止补加甘油，甘油彻底耗尽后，开始补加含PTM1 12ml/L的甲醇诱导表达PFK-K5，同时添加5～12％组氨酸至使发酵液终浓度达到0.01～0.5％，待甲醇耗尽后，再次补加甲醇，如此诱导表达36～60小时后结束发酵；(4)表达产物的分离提取。