[发明专利]具有α－糖苷酶抑制活性的龙血竭提取物及其制剂的质量控制方法

摘要

本发明涉及一种具有α－糖苷酶抑制活性的龙血竭降血糖提取物及其制剂的质量控制方法。其中包括鉴别法和含量测定法，属新药质量检测控制方法技术领域。本发明质量控制方法中的鉴别法包括高效液相鉴别法和薄层色谱鉴别法；质量控制方法中的含量测定法是采用分光光度法和荧光分析法的联合测定的方法。本发明的质量控制方法，对血竭提取物的其他制剂也同样适用。

主权项

1.具有α-糖苷酶抑制活性的龙血竭提取物的质量控制方法之一---鉴别法：A.高效液相色谱鉴别法：以剑叶龙血素A(4’-羟基-2，6-二甲氧基双氢查耳酮)、剑叶龙血素B[6-羟基-7-甲氧基-3-(4’-羟苄基)色原烷]和龙血素B(4’-羟基-2，4，6-三甲氧基双氢查耳酮)为高效液相色谱鉴别法的对照品；a.供试品溶液配制：取本品细粉适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含本品0.05-0.5mg的溶液，并经微孔(0.45μm)滤膜滤过；b.对照品溶液配制：精密称取对照品剑叶龙血素A适量，加甲醇制成每1ml含0.001-0.005mg的溶液作为对照品剑叶龙血素A溶液；精密称取对照品剑叶龙血素B适量，加甲醇制成每1ml含0.001-0.005mg的溶液作为对照品剑叶龙血素B溶液；精密称取对照品龙血素B适量，加甲醇制成每1ml含0.0001-0.001mg的溶液作为对照品龙血素B溶液；精密称取剑叶龙血素A、剑叶龙血素B和龙血素B适量，加甲醇制成每1ml含剑叶龙血素A 0.001-0.005mg、剑叶龙血素B 0.001-0.005mg和龙血素B0.0001-0.001mg的混合溶液作为混合对照品溶液；c.色谱条件与系统适用性试验：上述三种对照品溶液及其混合溶液，用高效液相色谱仪测定，色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为：(30-40)∶(4-6)∶(66-54)乙腈-甲醇-磷酸二氢钾(0.05mol/L)水溶液洗脱，检测波长为280nm，理论塔板数按剑叶龙血素A，剑叶龙血素B，龙血素B峰计算，各不低于3000，三种对照品与相邻峰的分离度≥1.5；d.鉴别步骤：分别精密吸取对照品溶液、对照品混合溶液与供试品溶液各2-30μl，注入高效液相色谱仪测定，得各自色谱图，确定剑叶龙血素A、剑叶龙血素B和龙血素B各自的保留时间，在供试品色谱图中与上述三种对照品相应色谱的保留时间处出现色谱峰，相对应的色谱峰保留时间的相对误差不超过2％，且供试品中剑叶龙血素B∶剑叶龙血素A∶龙血素B峰面积之比为(0.5-2.0)∶(4-6)∶(0.5-2.5)；B.薄层色谱鉴别法：以7，4’-二羟基黄酮、剑叶龙血素B[6-羟基-7-甲氧基-3-(4’-羟苄基)色原烷]和龙血素B(4’-羟基-2，4，6-三甲氧基双氢查耳酮)为薄层色谱鉴别法的对照品；a.供试品溶液的配制：取供试品细粉适量，加甲醇溶解，制成每1ml含本品0.5-2.0mg的溶液，作为供试品溶液；b.7，4’-二羟基黄酮薄层色谱鉴别：取7，4’-二羟基黄酮对照品，加甲醇制成每1ml含0.05-0.5mg的溶液，作为对照品溶液。用薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液2-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上以(18-25)∶1醋酸乙酯-甲醇为展开剂，展开后，晾干，置于紫外光365nm波长处检视，在供试品薄层色谱中，与对照品相应色谱的斑点位置上显相同颜色的荧光斑点；c.剑叶龙血素B薄层色谱鉴别：取剑叶龙血素B对照品，加甲醇制成每1ml含0.05-0.5mg的溶液，作为对照品溶液。用薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液2-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，(1-5)∶2醋酸乙酯-石油醚为展开剂，展开后，晾干，置于紫外光254nm波长处检视，在供试品薄层色谱中，与对照品相应色谱的斑点位置上显相同颜色的荧光斑点；d.龙血素B薄层色谱鉴别：取龙血素B对照品，加甲醇制成每1ml含0.05-0.5mg的溶液，作为对照品溶液。用薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液2-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上以(0.5-2.0)∶1丙酮-石油醚为展开剂，展开后，晾干，置于紫外光254nm波长处检视，在供试品薄层色谱中，与对照品相应色谱的斑点位置上显相同颜色的荧光斑点。