[发明专利]一种生产水牛可控性别体外胚胎的方法

摘要

一种生产水牛可控性别体外胚胎的方法，利用屠宰场水牛卵巢回收卵母细胞(或通过活体采卵获取水牛卵母细胞)，经体外成熟培养后，与经流式细胞仪分离的新鲜或冷冻的良种公牛的X或Y精子进行体外受精。受精卵在体外培养发育到囊胚期时回收胚胎，或进行移植或冷冻保存，胚胎移植后可产生出期望性别的后代。本发明的优点是可使胚胎生产性别化及工厂化，从而加快高产奶水牛扩繁速度。

主权项

1.体外生产水牛性别控制胚胎技术，其特征是下列步骤组成：(1)从屠宰场回收水牛卵巢，置于20～25℃无菌生理盐水中，用保温瓶带回实验室。从清洗干净的卵巢表面抽取卵母细胞(或通过活体采卵获取水牛卵母细胞)，将卵母细胞置于收集液中，在体视显微镜下选取卵母细胞，用收集液洗涤2～3次，再用成熟培养液洗涤一次。(2)将卵母细胞转入添加有血清、激素和卵泡液及含Hepes(N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸)的TCM199(组织培养基)的成熟培养液中，放入培养箱中进行成熟培养。(3)将由流式细胞仪分离的新鲜或冷冻解冻的水牛X或Y精子，通过Percoll(哌可液)梯度离心将精液中死精子与活精子分开。(4)将体外培养成熟后的卵母细胞从成熟液中拣出，用受精液洗涤2次后转入用受精液制成的受精滴中。精子稀释后将X或Y精子加入到含有卵母细胞的受精滴中，放入培养箱中进行体外受精培养。(5)体外受精培养6～8小时后，将假定的受精卵洗涤干净，然后置于预先制备好的、含有NCS(新生牛血清)的牛颗粒细胞单层培养液中，放入培养箱中体外培养6～8天。(6)在受精后第6、第7和第8天时回收囊胚，如有合适的受体牛，将胚胎进行移植。或将发育良好的优质胚胎进行冷冻保存处理，然后置于液氮罐中贮存。