[发明专利]作物DNA传感器检验作物种子、植株或商品同一性的方法

摘要

一种作物DNA传感器检验作物种子、植株或商品同一性的方法，是从作物的种子、植株或商品得到作物ssDNA，用碳粉、含12－25个碳原子的羧酸等调成改性碳糊，制成电极，将其表面置于EDC和NHS溶液中活化，将作物标样ssDNA修饰电极得作物DNA传感器。让传感器上的作物标样ssDNA与杂交液中能互补配对的作物样品ssDNA杂交反应，形成dsDNA。杂交液中的过渡金属离子－联吡啶络合物嵌入双链DNA分子中，且在传感器上发生电化学反应，于伏安图上在－0.02V～－0.05V区间呈现伏安峰，测量峰电流的变化即可鉴定作物种子、植株或商品的同一性并测出作物DNA的含量。该法可测定低至2ng/ml的DNA，是一种灵敏度高、选择性专一的技术。

主权项

1、一种作物DNA传感器检验作物种子、植株或商品同一性的方法，首先按常规方法，从作物的种子、植株或商品中提取DNA，通过变性处理，得到作物ssDNA，将所得作物ssDNA置入40μL～120μL离子强度为0.9～1.5的固定液中，然后用含量为55％～65％经热处理(300～400℃温度下热处理2h)的碳粉、含量为5％～12％的含12-25个碳原子的羧酸或烷基胺与液体石蜡调和成改性碳糊，将此改性碳糊填入电化学惰性的管材中，制成基体电极，再将该电极表面置于40μL～120μL EDC(1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐)和NHS(N-羟基磺酸酰亚胺酯)的混合活化液中活化，于上述固定液中将所提取的作物标样ssDNA通过共价键合，修饰固定于活化的基体电极上，从而得到作物DNA传感器，在含过渡金属离子-联吡啶络合物与NaCl、Tris 及待检测作物ssDNA的杂交液中，让传感器上的作物标样ssDNA与杂交液中能互补配对的作物样品(待检测作物品种)ssDNA进行杂交反应，形成dsDNA，杂交时间为数十分钟，在杂交过程中，杂交液中有氧化还原活性的过渡金属离子-联吡啶络合物嵌入双链DNA分子中，且在传感器上发生电化学反应，于伏安图上在-0.02V～-0.05V区间呈现伏安峰，测量峰电流的变化，通过比较，即通过峰电流变化大小的比较来鉴定作物种子、植株或商品的同一性，峰电流变化接近者具有同一性，否则不具有同一性，并由此测出作物DNA的含量。