[发明专利]一种预防和治疗日本血吸虫感染的相关基因和蛋白质及其用途

摘要

本发明公开了一种杀灭日本血吸虫童虫及预防、治疗日本血吸虫感染的蛋白质序列和相应基因序列及其用途。该蛋白质系利用亲和层析法、聚丙烯酰氨凝胶电泳、透析、冷冻干燥和蛋白质氨基端测序，从东方田鼠血清中分离得到血清白蛋白。利用聚合酶链式反应技术，获得东方田鼠血清白蛋白基因序列。将该基因以及修饰后的突变体插入真核表达载体，导入动物体内，可用于日本血吸虫感染的基因预防和治疗。可利用基因工程技术，生产东方田鼠血清白蛋白及其突变体，用于血吸虫病的预防和治疗。通过建立转基因动物，使疫区动物对日本血吸虫产生永久性抗性，阻断日本血吸虫的传播和血吸虫病的蔓延。

主权项

1.东方田鼠血清白蛋白系利用亲和层析法、聚丙烯酰氨凝胶电泳、透析、冷冻干燥，从东方田鼠长江亚种和宁夏指名亚种血清中分离得到。东方田鼠白蛋白对在体外培养的日本血吸虫童虫有明显的杀灭作用，对在体内接种血吸虫尾蚴的小白鼠有明显的预防和治疗作用。将成年东方田鼠用乙醚麻醉，眼框取血。血液收集于试管中，冰箱4℃过夜，使血液凝固。血液凝固后，3000转/每分钟，离心5分钟，收集血清。东方田鼠血清用缓冲液I(0.05M KH2PO4，pH7.0)按1∶1稀释，经10000rpm离心去除不溶性物质后，上样于蓝色琼脂糖凝胶FF亲和层析柱顶部。层析柱用缓冲液I洗脱，以去除未结合蛋白质。随后用缓冲液II(0.05M KH2PO4，1.5MKCl，pH7.0)对血清白蛋白进行洗脱，收集洗脱液。透析袋(透析分子量8000～14000kDa)用缓冲液I透析平衡24小时(其间换液至少3次)。将含有血清白蛋白的洗脱液置于透析袋内，4℃对水充分透析去盐3天(其间换液至少6次)，真空冷冻干燥。用12％SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳，对纯化的白蛋白进行纯度鉴定。