[发明专利]香蕉枯萎病菌致病性多聚半乳糖醛酸酶基因及其克隆

摘要

本发明公开了一种香蕉枯萎病菌致病性多聚半乳糖醛酸酶基因，本发明还公开了一种香蕉枯萎病菌致病性多聚半乳糖醛酸酶基因克隆，根据已测的PGC1蛋白N末端编码序列设计引物，以香蕉枯萎病菌4号生理小种菌株总RNA为模板，采用RT－PCR方法，合成cDNA的第一条链，5’RACE和3’RACE的方法克隆PGC1 cDNA的全长序列，推测出PGC1的氨基酸序列。本发明获得的PGC1基因cDNA序列，可以作为区分FOC1号和4号小种的依据；将PGC1基因转化到真核微生物中，所表达的PGC1可以作为免疫蛋白抗原制作动物血清，作病原菌检测使用；真核微生物表达产物可以代替病原菌作靶标物，广泛筛选对PGC1有效的抗病基因，供香蕉抗枯萎病转基因育种使用。

主权项

1、一种香蕉枯萎病菌致病性多聚半乳糖醛酸酶基因，其核苷酸序列，PGC1cDNA的全长序列如下：cttcaacaac tctttgcatc ctcttgtctt tgtctcacac gaatatcaca atg gtt     56cga aac atc gct att gcg gct ttg ctg cca gct gcc ttt gct tca acg    104ctg cct cga gat ccc tgc agc gtg act gac tac tcc ggc ctc gcc acc    152gcc gtc tca tct tgc aca aac att gtg ctc aac ggt ttc caa gtc ccc    200act ggc aag gct ctt gat cta tcc aag ctc aag gac ggc gca acc gtt    248acc ttc aag ggc aag acc acg ttt gcc act act gcc gat aac gac ttt    296gat cct atc gtc att agc gga aat ggc atc act ata act ggt gca tct    344ggc cat gtc att gat ggt aac ggc ccg gcg tac tgg gat ggc gaa ggt    392tct aac aac aag aaa aac cca aag ccc gac cat ttc atc gtt gtc aag    440aag act acc ggc aac tca aag atc aca aac ctg aac atc cag aac tgg    488ccc gtt cac tgc ttc gac atc aca ggc agt tca caa ttg acc atc tca    536ggg ctc att ctt gat aac aga ctt ggc gac aag ccc aat gcc aag agc    584ggt agc ttg ccc gct gcg cac aac agc gac ggt ttc gac atc ccg tcc    632agt gac cac gtt act ctg gat aac att cat gtt tat aac cag gat gac    680tgt gtt gct gtc act tcg ggt aca aac atc atc gtc tcc aac atg tac    728tgc tcc ggt ggt cat ggt ctt agc att gga tct gtt ggc ggc aag agc    776aac aat gtc gtc aat ggt gtt cag ttc ttg gat tcg cag att gtt aac    824agt gag aat gga tgc cgc atc aag tcc aac tct ggc aca act ggc acg    872att gag aac gcc acg tac caa aac att gcc ctt acc aac atc agc aaa    920tat ggt gtc gat gtc cag cag gac tat ctc aac ggt ggc cct act gga    968aag ccc acc aac gga gtc aag atc agc ggt atc aag ttc atc aag gtc    1016act ggt aca gtg gct agc tct gct caa gat tgg tat att ctg tgt ggc    1064gat ggt agc tgc tct gga ttc act ttc tct gga aac gcc atc act ggt    1112ggt ggc aag act agc agc tgc aac tat cct acc aac act tgc cct agc    1160aag gtc aaa gcg gga cga tca cca ctc cat gtt cac aaa gct aga acc    1208cag tca aag agt ggt ctt acg gtt gtt gcg tgg aat tgc tgc ggc gga    1256cag ttg tgagcttggg tctatagtag tatttgtccg atagtcacta ggcttatctt     1312agcaatacac tttatttatc gcaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa   1372aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa         1426其PGC1的氨基酸序列如下：Met Val Arg Asn Ile Ala   Ile Ala Ala Leu Leu Pro Ala Ala Phe Ala1                5                    10                  15Ser Thr Leu Pro ArgPro Cys Ser Val Thr Asp Tyr Ser Gly Leu            20                   25                   30Ala Thr Ala Val Ser Ser   Cys Thr Asn Ile ValLeu Asn Gly Phe Gln        35                    40                  45Val Pro Thr Gly Lys Ala   Leu Asp Leu Ser Lys Leu Lys Asp Gly Ala    50                    55                  60Thr Val Thr Phe Lys Gly   Lys Thr Thr Phe Ala Thr Thr Ala Asp Asn65                  70                    75                  80Asp Phe Asp Pro Ile Val   Ile Ser Gly Asn Gly Ile Thr Ile Thr Gly                85                    90                  95Ala Ser Gly His Val Ile   Asp Gly Asn Gly Pro Ala Tyr Trp Asp Gly            100                   105                 110Glu Gly Ser Asn Asn Lys   Lys Asn Pro Lys Pro Asp His Phe Ile Val        115                   120                 125Val Lys Lys Thr Thr Gly   Asn Ser Lys Ile Thr Asn Leu Asn Ile Gln    130                   135                 140Asn Trp Pro Val His Cys   Phe Asp Ile Thr Gly Ser Ser Gln Leu Thr145                 150                   155                 160Ile Ser Gly Leu Ile Leu   Asp Asn Arg Leu Gly Asp Lys Pro Asn Ala                165                   170                 175Lys Ser Gly Ser Leu Pro   Ala Ala His Asn Ser Asp Gly Phe Asp Ile            180                   185                 190Pro Ser Ser Asp His Val   Thr Leu Asp Asn Ile His Val Tyr Asn Gln        195                   200                 205Asp Asp Cys Val Ala Val   Thr Ser Gly Thr Asn Ile Ile Val Ser Ash    210                   215                 220Met Tyr Cys Ser Gly Gly His Gly Leu Ser Ile Gly Ser Val Gly Gly225                 230                 235                 240Lys Ser Asn Asn Val Val Asn Gly Val Gln Phe Leu Asp Ser Gln Ile                245                 250                 255Val Asn Ser Glu Asn Gly Cys Arg Ile Lys Ser Asn Ser Gly Thr Thr            260                 265                 270Gly Thr Ile Glu Asn Ala Thr Tyr Gln Asn Ile Ala Leu Thr Asn Ile        275                 280                 285Ser Lys Tyr Gly Val Asp Val Gln Gln Asp Tyr Leu Asn Gly Gly Pro    290                 295                 300Thr Gly Lys Pro Thr Asn Gly Val Lys Ile Ser Gly Ile Lys Phe Ile305                 310                 315                 320Lys Val Thr Gly Thr Val Ala Ser Ser Ala Gln Asp Trp Tyr Ile Leu                325                 330                 335Cys Gly Asp Gly Ser Cys Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Asn Ala Ile            340                 345                 350Thr Gly Gly Gly Lys Thr Ser Ser Cys Asn Tyr Pro Thr Asn Thr Cys        355                 360                 365Pro Ser Lys Val Lys Ala Gly Arg Ser Pro Leu His Val His Lys Ala    370                 375                 380Arg Thr Gln Ser Lys Ser Gly Leu Thr Val Val Ala Trp Asn Cys Cys385                 390                 395                 400Gly Gly Gln Leu其中Pro Cys Ser Val Thr Asp Tyr Ser Gly Leu Ala Thr Ala Val Ser Ser CysThr Asn Ile Val为已知PGC1蛋白N端测序部分，为PGC1成熟蛋白N端编码氨基酸。