[发明专利]香蕉枯萎病菌致病性多聚半乳糖醛酸酶的提取纯化方法无效
| 申请号： | 200510033297.2 | 申请日： | 2005-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN1673366A | 公开（公告）日： | 2005-09-28 |
| 发明（设计）人： | 王振中;王琪 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 | 代理人： | 伍宏达 |
| 地址： | 51064*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种香蕉枯萎病菌多聚半乳糖醛酸酶的提取纯化方法，将粗酶液上样于Sephacry S－10016/10凝胶层析柱，用柱平衡缓冲液洗脱，收集混合酶活性大于粗酶活性25％的洗脱液，浓缩脱盐，浓缩液上样于Sepharose SPXL16/10强阳离子交换层析柱，进行线性梯度洗脱，收集梯度洗脱部分，将酶活性大于上样液酶活性25％的洗脱液混合，浓缩脱盐，浓缩液上样于Sepharose FF CM弱阳离子交换层析柱，进行线性梯度洗脱，收集梯度洗脱峰，浓缩脱盐。本发明提取纯化方法从香蕉枯萎病菌中提取致病性内切半乳糖醛酸酶，可以作为该病菌的检疫检测的新的指标，并能应用致病性内切半乳糖醛酸酶，制备香蕉枯萎病菌抗血清及在筛选和培育新的香蕉抗病品种。 | ||
| 搜索关键词： | 香蕉 枯萎 病菌 致病性 半乳糖 醛酸 提取 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1、一种香蕉枯萎病菌多聚半乳糖醛酸酶的提取纯化方法，其提取纯化方法包括以下步骤：(1)将香蕉枯萎病菌4号生理小种接种于诱导果胶酶液体培养基中，振荡培养；于4℃离心除去菌丝，上清液用超滤膜浓缩得粗酶液；(2)粗酶液上样于Sephacry S-100 16/10凝胶层析柱，预先用柱平衡缓冲液平衡柱，用柱平衡缓冲液洗脱，收集洗脱液，测酶活性及蛋白含量；(3)收集步骤(2)中混合酶活性大于粗酶活性25％的洗脱液，浓缩脱盐，测浓缩液酶活性及蛋白含量；浓缩液上样于Sepharose SP XL 16/10强阳离子交换层析柱，预先用柱平衡缓冲液平衡柱，用柱平衡缓冲液配置的0.75mol/L NaCl溶液进行线性梯度洗脱，收集梯度洗脱部分，测PG活性及蛋白含量；(4)收集酶活性大于上样液酶活性25％的洗脱液混合，浓缩脱盐，测浓缩液的酶活性及蛋白含量后，浓缩液上样于Sepharose FF CM弱阳离子交换层析柱，用柱平衡缓冲液配置的0.75mol/L NaCl溶液进行线性梯度洗脱，收集梯度洗脱峰，浓缩脱盐，即为纯化的多聚半乳糖醛酸酶PGC1。
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