[发明专利]中药决明子蛋白质的提取方法和应用

摘要

本发明涉及分子量为19680的中药决明子蛋白质的提取方法，包括：决明子粗蛋白的提取；决明子粗蛋白的提纯；决明子蛋白质peak2的分离纯化；得到的蛋白质能显著抑制细胞内胆固醇的合成，具有明显的降脂作用；本发明还涉及所述中药决明子蛋白质在制备降脂药物中的应用。

主权项

1、一种中药决明子蛋白质的提取方法，其特征在于包括如下步骤：(1)决明子粗蛋白的提取，包括：——在4-8℃条件下，将决明子碾碎后用石油醚或环己烷浸泡脱脂24-48小时，分2-4次进行；——回收溶剂，残渣按1g∶10ml-1g∶50ml的体积浸泡于50mmol pH为8.0的KH2PO4-NaOH中8-12小时，重复3-5次，合并提取液；——提取液离心20-30min，取上清液；上清液边搅拌边加入硫酸铵至45％-55％的饱和度，离心分离，保留沉淀；沉淀物在分子量3,000-8,000的透析袋中进行脱盐；——冷冻干燥仪中-20℃至-80℃温度下进行冷冻干燥，得到粉末状决明子粗蛋白，-20℃冷藏备用；(2)决明子粗蛋白的提纯，包括：——将上述方法得到的粉末状决明子粗蛋白充分溶解于15mmol-25mmol pH为7.0-8.0的Tris-HCl的缓冲液中；——用分子筛层析柱进行初步纯化，分子筛层析柱上样前先用含有0.15-0.3mol NaCl的上述缓冲液平衡2-5倍柱体积；每次上样量为180ul-240ul，监测波长为280nm，流速为0.3-0.7ml/min；决明子粗蛋白经分子筛层析被分成5个峰：分别为peak1、peak2、peak3、peak4和peak5；(3)决明子蛋白质peak2的分离纯化，包括：用离子交换柱纯化peak2，离子交换柱按照A液与B液依次交替的程序平衡，A液为15mmol-25mmol pH为7.0-8.0的Tris-HCl，B液为含有1.0mol NaCl的A液；将peak2浓缩、脱盐，上样量为25mg-50mg/ml；柱子用0-1.0mol的NaCl梯度、15mmol-25mmol pH为7.0-8.0的Tris-HCl的缓冲液进行洗脱，流速为0.8-1.5ml/min；peak2经离子交换柱层析被分成3个峰，分别为：peakI、peakII和peakIII，收集peakIII。