[发明专利]一种杨树的农杆菌基因转化方法无效
申请号: | 200510037948.5 | 申请日: | 2005-03-03 |
公开(公告)号: | CN1657629A | 公开(公告)日: | 2005-08-24 |
发明(设计)人: | 诸葛强;王婕琛;陈英;黄敏仁;王明庥;潘惠新;李火根;王光萍 | 申请(专利权)人: | 南京林业大学 |
主分类号: | C12N15/82 | 分类号: | C12N15/82;C12N15/63 |
代理公司: | 南京苏高专利事务所 | 代理人: | 柏尚春 |
地址: | 210037*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种杨树(新疆杨)的农杆菌基因转化方法,该方法包括从外植体选择、培养基筛选、激素调配、抗生素敏感性、培养条件等方面建立新疆杨高效遗传转化受体技术系统,本发明的有益效果是:通过建立高效的新疆杨遗传转化系统,在短时间内可选育出新疆杨抗逆新品种。 | ||
搜索关键词: | 一种 杨树 杆菌 基因 转化 方法 | ||
【主权项】:
1、一种杨树的农杆菌基因转化方法,其特征是该方法包括以下步骤:(1)将新疆杨试管苗置于基本培养基上继代繁殖;(2)在继代的试管苗上选取幼嫩、平展的叶,剪去叶边缘,剪成预定面积的叶盘为外植体,接种于叶盘分化培养基T上预培养;(3)挑取农杆菌的菌落接种到含有四环素和链霉素的YEB液体培养基中,振荡培养时间后,取预定体积转接至YEB液体培养基,待菌体进入指数生长期,通过离心得到菌体,取基本培养基MS液体培养基悬浮菌体,获得侵染菌液;(4)将步骤(2)的预培养后的叶盘浸入步骤(3)的侵染菌液,振荡,浸泡后,除去多余菌液,放回叶盘分化培养基T上进行共培养;(5)对共培养后的叶盘洗涤除去农杆菌,叶柄转移到叶柄分化筛选培养基T3上培养,叶盘转移到叶盘分化初次筛选培养基T1上培养,一段时间后,换用叶盘分化二次筛选培养基T2,直至分化出可见Kmr芽;(6)将Kmr芽连同外植体一同移入不定芽伸长筛选培养基Y继代培养;(7)待Kmr芽伸长至一定长度,将每个Kmr芽分离独立接入不定芽伸长筛选培养基Y筛选,2-3周继代一次,至Kmr芽长至一定长度后,移入生根筛选培养基G。
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