[发明专利]一种无桔霉素红曲霉基因工程菌的构建方法无效
| 申请号： | 200510039138.3 | 申请日： | 2005-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN1687396A | 公开（公告）日： | 2005-10-26 |
| 发明（设计）人： | 诸葛健;周礼红;方慧英 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/15 | 分类号： | C12N1/15;C12N15/80;C12N15/10;C12N15/66;C12N15/31;C07K14/38;C12P21/02 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利事务所 | 代理人： | 时旭丹 |
| 地址： | 214036*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 一种无桔霉素红曲霉基因工程菌的构建方法，属于微生物基因工程领域。本发明提供了(1)来源于CICC5006的桔霉素编码基因pksCT序列；(2)构建CICC5006桔霉素基因的克隆载体pBpksCT和敲除载体pBpksCTHyg；(3)REMI介导CICC5006桔霉素基因敲除方法。利用本发明方法，可以用于阻断红曲霉中桔霉素的代谢途径，进而从根本上解决色素生产过程中桔霉素伴生和污染问题，保证红曲产品的安全性，达到改善红曲产品质量和深度开发的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 霉素 曲霉 基因工程 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种无桔霉素红曲霉基因工程菌的构建方法，其特征是：(1)引物设计：以GeneBank公布的M.purpureus桔霉素的基因序列为基础设计引物，pksCT-F：5′-GGCCGCGGCCGCGCTTCTTACCAACTTCCCTT-3′，pksCT-R：5′-GGCCGTTAACACCTTCAGTCCGCTATCTATC-3′；(2)pksCT基因克隆：通过PCR技术，以CICC5006基因组DNA为模板，以pksCT-F、pksCT-R为引物扩增得到4.1kb的桔霉素编码基因片段命名为pksCT；(3)pBpksCT载体的构建：pksCT两端分别引入了Not I和Hpa I酶切位点，经纯化回收后分别用Not I和Hpa I酶切，插入pBluescript II(-)的Not I和SmaI位点，构建得到pBpksCT载体；(4)桔霉素基因敲除载体pBpksCTHyg的构建：将来自载体pCB1003 1.4kb的Hpa I酶切片段，该片段含有来自Aspergillus nidulans trpC基因的启动子和hygromycin B抗性基因hph序列，插入载体pBpksCT的Sma I位点，Sma I位点位于pksCT基因序列内2253bp处，构建得到红曲霉桔霉素敲除载体pBpksCTHyg；(5)REMI介导敲除：载体pBpksCTHyg通过REMI介导敲除CICC5006桔霉素基因，构建得到无桔霉素红曲霉基因工程菌。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学，未经江南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/200510039138.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
